14057.唐魚卵黃蛋白原啟動子調控綠色熒光蛋白表達的重組酵母的構建

1、華南師范大學碩士學位論文唐魚卵黃蛋白原啟動子調控綠色熒光蛋白表達的重組酵母的構建陳純純導師姓名職稱：馬廣智教授院系：生命科學學院專業(yè)：水生生物學答辯日期：二零一三年五月二十五日摘要唐魚卵黃蛋白原啟動子調控綠色熒光蛋白表達的重組酵母的構建摘要專業(yè)名稱：申請者姓名：導師姓名：水生生物學陳純純馬廣智教授本論文利用唐魚卵黃蛋白原啟動子和唐魚雌激素受體片段，以雙載體表達的方式構建對雌激素活性物質刺激敏感的基因重組酵母AHl09／tERapr2GF

2、P，初步建立一種可用于檢測環(huán)境雌激素的分子生物學方法。旨在能夠快速篩選環(huán)境雌激素類的化合物。本研究主要包含三部分內容：(一)構建含有唐魚卵黃蛋白原啟動子的報告載體。從已知的3條啟動子序列中挑選合適片段，以唐魚基因組DNA為模板，設計帶有酶切位點的特異性引物，PCR克隆出唐魚卵黃蛋白原啟動子promoter2片段，將其插入克隆載體pMD181simplevector。再將該克隆片段插入pEGFPN1vector中，構建由唐魚卵黃蛋白原啟動

3、子promoter2調控的EGFP基因(EGFP)的雌激素作用報告載體pEGFP／pr2。將該質粒轉化大腸桿菌，對轉化子進行PCR與抽提質粒雙酶切鑒定，結果顯示有目的片段的特異條帶，證實promoter2已成功插入pEGFPN1vector中。(二)在表達載體中，將唐魚雌激素受體基因片段插入載體pGADT7中，利用載體上的乙醇脫氫酶1啟動子(ADHl)驅動Gt唐魚雌激素受體基因(tERa)表達。在報告載體中，用唐魚卵黃蛋白原啟動子片段2