日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵黃蛋白原合成的初步研究.pdf

1、甲殼綱十足目卵巢中卵黃蛋白的來源，在過去的幾十年研究中一直存在爭議，內源性合成和外源性合成均有報道，不同發(fā)育階段中內源和外源性合成的相對比重也有不同。本文以日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)為對象，初步探討其卵巢發(fā)育不同階段的特征、卵黃蛋白原的合成部位以及相對合成量。由實驗中所收集到的日本沼蝦其卵巢的組織學切片中一共可以見到四類不同發(fā)育階段的卵細胞：卵原細胞--細胞體積很小，細胞核幾乎占據整個細胞；發(fā)育期的卵母細

2、胞---細胞直徑約95μm，核占細胞一半左右；膨大期的卵母細胞---細胞直徑約為140μm，核占細胞的1/4～1/3；成熟期卵母細胞---細胞直徑大于300μm，核只有細胞的1/10左右，細胞胞質出現(xiàn)大量嗜酸性卵黃顆粒。結合卵巢外部形態(tài)特征觀察、性腺指數(shù)和上述組織學研究結果，分別統(tǒng)計各個卵巢切片中不同發(fā)育期的卵細胞，將最大比例的一類卵細胞所代表的發(fā)育階段定為該研究個體的發(fā)育期，最終將本文實驗所用日本沼蝦的卵巢發(fā)育分為五期：卵黃發(fā)生前期、

3、初級卵黃發(fā)生期、次級卵黃發(fā)生期、成熟期和抱卵期(消退期)。 將處于不同卵巢發(fā)育期的日本沼蝦卵巢和肝胰腺分別提取總RNA，用RT-PCR的方法研究日本沼蝦卵巢和肝胰腺卵黃蛋白原mRNA的表達，首先確定是否分別具有卵黃蛋白原的合成功能。檢測結果可以初步判定日本沼蝦卵巢和肝胰腺都存在卵黃蛋白原mRNA的表達，兩者都是卵黃蛋白原的合成部位，同時發(fā)現(xiàn)其合成量與卵巢的發(fā)育階段存在相關。再利用半定量RT-PCR的方法研究卵黃蛋白原在不同卵巢發(fā)

4、育階段中在兩種組織中的相對表達量，結果顯示，在卵黃發(fā)生前期卵黃蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中的表達都較弱；隨著卵巢的發(fā)育，卵黃蛋白原mRNA在兩者中的相對表達量都在增加，在抱卵期相對表達量達到最高，且到后期肝胰腺的表達量增加尤其明顯。上述結果表明，在卵巢發(fā)育前期，卵巢和肝胰腺合成卵黃蛋白原的能力都較弱，隨著發(fā)育的進行，卵巢和肝胰腺合成卵黃蛋白原的能力都在增加，并在抱卵期達到最大，且到后期肝胰腺卵黃蛋白原合成能力的增加尤其明顯。