日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)飼料亞麻酸營(yíng)養(yǎng)生理研究.pdf

1、亞麻酸(18:3n-3，LNA)對(duì)甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)、免疫、抗氨氮脅迫和脂質(zhì)代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用，本研究采用營(yíng)養(yǎng)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)與方法，系統(tǒng)地研究了亞麻酸(18:3n-3，LNA)對(duì)日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)的營(yíng)養(yǎng)生理作用。分析了飼料LNA水平對(duì)日本沼蝦幼蝦生長(zhǎng)性能、抗氧化、非特異性免疫性能和抗氨氮脅迫的影響；探討了飼料LNA水平機(jī)體脂肪酸組成及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的影響；克隆了Δ6脂肪酸去飽

2、和酶（Δ6 FAD）基因，分析了該基因的分子結(jié)構(gòu)，探討了飼料LNA水平對(duì)其表達(dá)的影響。具體研究結(jié)果如下：
　　配制LNA含量分別為0％（L0，對(duì)照組）、0.5%（L0.5）、1.0%（L1.0）、1.5%（L1.5）、2.0%（L2.0）和2.5%（L2.5）的6組等氮等脂的半純化飼料，飼養(yǎng)日本沼蝦幼蝦（始均重為0.12±0.01g）8周，之后進(jìn)行24h氨氮（氯化銨濃度為36.60mg/L）脅迫，分析對(duì)日本沼蝦幼蝦生長(zhǎng)、存活、抗氧

3、化能力、非特異性免疫性能和氨氮脅迫下生理指標(biāo)的影響，探討日本沼蝦幼蝦飼料中適宜 LNA添加量。結(jié)果表明：日本沼蝦特定生長(zhǎng)率、增重率和存活率均隨飼料LNA水平的升高呈先升后降的趨勢(shì)；隨著飼料中LNA添加量的增加，日本沼蝦肝胰腺SOD、GSH-Px活性和T-AOC基本呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，且都在L1.0組達(dá)到最高，顯著高于其余各組（P＜0.05）；L0組肝胰腺中MDA含量顯著高于其余各組（P＜0.05）；飼料LNA水平的增加顯著提高了ACP和

4、LYZ的活性，分別在L1.0組和L1.5組達(dá)到最高值；氨氮脅迫后，L0組的MDA顯著高于LNA添加組，在LNA添加量達(dá)1.5%時(shí)，MDA含量顯著低于其余各組(P＜0.05)，同時(shí)肝胰腺T-SOD、GSH-Px和T-AOC活性均隨飼料LNA含量升高呈先上升后下降趨勢(shì)，其中T-SOD活性在L1.5組達(dá)到最高，而T-AOC和GSH-Px在L1.0組活性達(dá)到最高。以SOD活性為指標(biāo)，經(jīng)二次回歸方程分析表明，日本沼蝦有效LNA需要量為1.19%。

5、綜上，飼料LNA添加量在1.0%～1.5%之間時(shí)，能顯著提高日本沼蝦幼蝦抗氧化性能和免疫力，緩解氨氮脅迫對(duì)其造成的負(fù)面影響。
　　亞麻酸是合成機(jī)體HUFA的前體，通過(guò)添加LNA來(lái)調(diào)控機(jī)體HUFA含量對(duì)降低飼料成本具有重要意義。飼喂日本沼蝦LNA含量分別為0%（L0，對(duì)照組）、0.5%（L0.5）、1.0%（L1.0）、1.5%（L1.5）、2.0%（L2.0）和2.5%（L2.5）的6組等氮等脂的半純化飼料，分析其機(jī)體脂肪酸組成及

6、脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)量。結(jié)果表明：日本沼蝦肝胰腺脂肪含量隨著飼料LNA含量的增加降低，L2.5組脂肪含量顯著低于其余各組。肌肉及肝胰腺LNA含量隨著飼料LNA含量的增加而增加，肌肉及肝胰腺20:5n-3、22:5n-3
　　和22:6n-3含量高于其在飼料中的含量，但肌肉及肝胰腺組織20:5n-3、22:5n-3和22:6n-3含量并不隨機(jī)體的LNA增加而增加。乙酰輔酶A（ACC）、△9去飽和酶（SCD）和脂肪酸延長(zhǎng)酶6（elov

7、l6）mRNA表達(dá)量均隨飼料中LNA含量的升高呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，均在L2.5組達(dá)到最低值。而肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1（CPT1）mRNA表達(dá)量均隨飼料中LNA含量的升高呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，在L2.0組和L2.5組達(dá)到最高值。本研究表明，飼料LNA水平可以通過(guò)影響脂肪酸合成途徑及β氧化途徑降低機(jī)體脂肪含量，并通過(guò)影響脂肪酸去飽和酶和延長(zhǎng)酶mRNA表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪酸組成。
　　Δ6 FAD是HUFA合成過(guò)程中的限速酶。采用cDNA末端快速擴(kuò)增（R

8、ACE）技術(shù)克隆得到日本沼蝦Δ6 FAD cDNA全長(zhǎng)序列，并利用熒光定量PCR技術(shù)分析其在肝胰腺、心臟、肌肉、腸道、胃、鰓、血液、卵巢、卵子等9種組織的表達(dá)，同時(shí)分析飼料LNA水平對(duì)Δ6 FAD基因表達(dá)的影響，結(jié)果表明：Δ6 FAD全長(zhǎng)序列為1906bp，其中5'非編碼區(qū)（UTR）含122bp，3'非編碼區(qū)（UTR）含394bp，開(kāi)放閱讀框（ORF）包含1362bp，總共編碼453個(gè)氨基酸，并且編碼的蛋白序列具有典型的去飽和酶特性：1