鱖魚血清免疫球蛋白單克隆抗體的制備及特性分析.pdf

1、利用飽和硫酸胺分步鹽析法，提純鱖魚抗嗜水氣單胞菌(命名GYK-1)血清免疫球蛋白(Ig)。提純的鱖魚免疫球蛋白免疫Balb/C小鼠，無菌條件下取其脾臟細(xì)胞與SP2/O骨髓瘤細(xì)胞雜交融合?？贵w陽性的雜交瘤細(xì)胞用間接ELISA方法進(jìn)行篩選。經(jīng)篩選、二次亞克隆，最終獲得11株能穩(wěn)定分泌抗鱖魚Ig的單克隆抗體(Mab)細(xì)胞株。研究結(jié)果提示，不同魚類的免疫球蛋白既有自身的特異性抗原位點，也存在共同的抗原決定簇。這些共同抗原決定簇不僅存在于近親品種

2、之間；也存在于親緣距離較遠(yuǎn)的之間，如鱖魚、鰻魚。從單抗與歐洲鰻、日本鰻血清的交叉程度不同還可看出，歐洲鰻與日本鰻血清Ig之間有高度的相似性，但又存在著種屬的差異。　　又利用鱖魚單克隆抗體腹水7F12F6交聯(lián)Sepharose4B制備親和層析柱。通過免疫親和層析純化鱖魚血清Ig。用親和層析純化出的鱖魚Ig免疫新西蘭兔，制備了兔抗鱖魚Ig的多抗血清。用ELISA方法對單抗和多抗的特性進(jìn)行了比較。SDS-PAGE及ELISA結(jié)果表明，純化后

3、的血清Ig純度較高。通過變性還原及非變性非還原條件下的免疫印跡試驗(Western-blot)對血清Ig的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)變性還原下血清Ig重鏈分子量為72KD，輕鏈為29KD，非變性非還原條件下，只出現(xiàn)一條高分子量條帶，約800KD?！　◆~類免疫球蛋白是其體液免疫中的重要組成部分，對Ig結(jié)構(gòu)、免疫原性、理化性質(zhì)等方面的研究將有助于深入了解魚類體液免疫應(yīng)答規(guī)律，建立魚類Ig分析與檢測方法，評價疫苗體液免疫效果，推動免疫診斷和