多次傳代和致細胞病變豬瘟E2基因序列分析及病變細胞中DI顆粒的檢測.pdf

1、　　本文利用反轉錄PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技術，對多次動物傳代和致血管內皮細胞病變的豬瘟病毒石門株E2基因的核苷酸序列進行了測定，并與標準石門株的核苷酸及氨基酸序列的同源性進行比較及分析，以期了解豬瘟主要保護性抗原E2基因的變異情況，為豬瘟的防制提供分子流行病學方面的資料。同時用豬瘟病毒石門株脾毒接種分離培養(yǎng)的豬臍靜脈血管內皮細胞，在引起細胞病變后，用Northern雜交技術對病變細胞中有無病毒DI顆粒的存在進行檢

2、測，對豬瘟病毒石門株致豬血管內皮細胞病變的機制進行探討。主要試驗和結果如下：(1)采用RT-PCR和nPCR技術擴增出經(jīng)豬體多次傳代豬瘟病毒石門株脾毒E2基因，將其克隆于pMD18-T載體并進行核苷酸序列測定，用DNAstar軟件比較分析脾毒E2基因與標準石門株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。結果發(fā)現(xiàn)，脾毒和標準石門株的核苷酸序列同源性為99.4﹪，氨基酸序列同源性為99.0﹪，通過對主要抗原區(qū)域氨基酸位點變異進行分析，發(fā)現(xiàn)E2基因抗原決

3、定簇未發(fā)生明顯的變異。(2)用豬瘟脾毒接種豬血管內皮細胞，對引起細胞病變的細胞毒E2基因進行克隆測序，比較分析細胞毒E2基因與標準石門株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。結果發(fā)現(xiàn)，細胞毒標準石門株的核苷酸序列同源性為98.3﹪，氨基酸同源性為96.7﹪，通過對主要抗原區(qū)域氨基酸位點變異進行分析，發(fā)現(xiàn)E2基因的變異也比較小，但發(fā)現(xiàn)細胞毒E2基因較多次傳代脾毒的變異大，說明豬瘟病毒在豬體比組織培養(yǎng)的遺傳穩(wěn)定性高。(3)根據(jù)資料，設計引物擴增出豬