顯微切割胃癌及癌前病變細胞分析染色體7q31.1雜合性缺失

1、南華大學碩士學位論文顯微切割胃癌及癌前病變細胞分析染色體7q31.1雜合性缺失姓名：王麗江申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：甘潤良;蘇琦20040525! 墮些 塑蘭點堂堡±堂堡! ! ! 生顯微切割胃癌及癌前病變細胞分析染色體7 q 3 1 ．1 雜合性缺失碩士研究生導 師王麗江甘潤良教授蘇琦教授中文摘要目的顯微切割胃癌及癌前病變細胞檢測染色體7 q 3 1 ．1 區(qū)域的雜合性缺失，繪制胃癌及癌前病變7 q

2、 3 1 ．1 區(qū)域等位基因缺失圖譜，確定其常見最小缺失區(qū)域，探索胃粘膜上皮癌變過程中不同階段病變細胞的分子遺傳學改變，分析7 q 3 1 ．1 雜合性缺失與胃癌及癌前病變病理臨床特征的關系，從而為研究胃癌發(fā)病的分子機理及定位克隆在染色體7 q 3 1 ．1 區(qū)域胃癌相關的侯選抑癌基因提供實驗依據(jù)；同時摸索、改進并優(yōu)化從石蠟組織中提取基因組D N A 的方法。方法在胃癌及癌前病變石蠟切片上行顯微切割，獲得胃癌及癌前病變細胞。用C h e

3、 l e x - 1 0 0等方法分別抽提切割細胞和相應正常對照細胞的D N A 。用高密度微衛(wèi)星標志結合P C R 技術檢測胃癌及癌前病變染色體7 q 3 1 1 雜合性缺失，繪制胃癌及癌前病變染色體7 q 3 1 ．1 等位基因的缺失圖譜，確定其常見最小缺失區(qū)域。采用四格表確切概率法判斷染色體7 q 3 1 ．1雜合性缺失與胃癌及癌前病變臨床特征的關系。結果應用顯微切割的方法能提高腫瘤組織雜合性缺失研究的陽性率，C h e l e

4、x 一1 0 0 抽提法是從石蠟組織中提取D N A 的較為可靠、有效的方法。研究發(fā)現(xiàn)胃癌染色體7 q 3 1 ．1 至少有一個位點存在雜合性缺失的2 l 例，占7 0 ％( 2 1 ／3 0 ) ；D 7 S 2 4 5 9 、D 7 S 5 2 3 、D 7 S 2 5 0 2 、D 7 S 4 8 6 、D 7 S 4 8 0 、D 7 S 6 5 0 、D 7 S 2 4 8 6 各位點雜合性缺失頻率分別為1 0 ．O ％、6

5、．7 ％、2 3 _ 3 ％、4 3 ．3 ％、2 6 ．7 ％、2 6 ．7 ％、2 0 ．O ％；缺失圖譜分析顯示部分胃癌常見最小缺失區(qū)域位于D 7 S 2 5 0 2 ．D 7 S 4 8 0 之間。統(tǒng)計學分析表明這一區(qū)帶微衛(wèi)星位點的等位基因缺失陽性率與病人年齡、性別、原發(fā)灶位置、病理分期、分化程度以及淋巴結轉移不相關( 尸> O ．0 5 ) 。結果表明胃癌病變腸化組織中存在染色體7 q 3 1 ．1 雜合性缺失，但缺失頻