原發(fā)性肝癌染色體8p和16q雜合性丟失的研究.pdf

1、背景
　　原發(fā)性肝癌是全世界范圍內(nèi)最常見惡性腫瘤之一。最近的流行病學(xué)研究表明，全球每年約有62萬(wàn)新增病例，而且隨著全球化進(jìn)一步加劇，過去25年不僅在發(fā)展中國(guó)家，在一些西發(fā)達(dá)國(guó)家其發(fā)病率及死亡率也呈逐年上升之勢(shì)。但其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的內(nèi)在分子機(jī)理作用仍未很好闡明，一直是腫瘤研究領(lǐng)域熱點(diǎn)問題。目前，腫瘤分子遺傳學(xué)研究表明癌發(fā)生涉及多個(gè)因素參與，其中遺傳基因的變異是腫瘤發(fā)生關(guān)鍵因素，而癌基因的激活和（或）抑癌基因的的失活起了相當(dāng)關(guān)鍵作用

2、，抑癌基因作用機(jī)制的研究越來(lái)越受到重視。最近多研究中心發(fā)現(xiàn)在HCC組織中有染色體1p，1q，4q，6q，8p，10q，13q，14q，16q，17p和22q等區(qū)域存在雜合性高頻丟失，而染色體特定部位發(fā)生雜合性丟失（LOH）等遺傳變異引起抑癌基因的失活。由于染色體的微衛(wèi)星位點(diǎn)存在地理區(qū)域性差異，篩選出的染色體片段仍有待進(jìn)一步精確，染色體遺傳變異在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的作用仍需深入探討。
　　目的
　　通過對(duì)SNP6.0芯片篩選

3、出的染色體8和16的部分基因及染色體片段上具有8個(gè)有高度多態(tài)性的微衛(wèi)星位點(diǎn)雜合性丟失（LOH）狀態(tài)研究，分析HCC上特定微衛(wèi)星位點(diǎn)的LOH發(fā)生頻率與HCC發(fā)生發(fā)展關(guān)系及其與臨床病理特點(diǎn)之間的關(guān)系，以期初步篩選HCC相關(guān)的抑癌基因，為HCC的早期診斷、分子分型及預(yù)后預(yù)警提供可能的新分子標(biāo)記物。
　　方法
　　1、收集肝細(xì)胞肝癌組織及癌旁對(duì)照組織病理標(biāo)本45例，標(biāo)本均有病理學(xué)檢查，并經(jīng)兩位資深病理學(xué)專家確診。
　　2、選取

4、SNP6.0基因芯片篩選出的染色體高頻異常部位的8個(gè)微衛(wèi)星多態(tài)性位點(diǎn)，分別是：D8S261、D8S499、D8S1125、D8S1810、D8S1827、D16S402、D16S422、D16S511。依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)微衛(wèi)星位點(diǎn)引物。
　　3、采用聚合酶鏈反應(yīng)-變性聚丙烯酰胺凝膠-銀染法分析各標(biāo)本組織具有高度多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn)雜合性丟失（LOH）的狀態(tài)。并通過卡方檢驗(yàn)或Fisher’s確切概率檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，探討其與臨

5、床病理特征之間的關(guān)系。
　　結(jié)果
　　1、LOH檢測(cè)頻率45例HCC組織的8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的LOH檢出頻率分別是:D8S261（39.02％，16/41）、D8S499（34.88％，15/43）、D8S1125（15.38％，4/26）、D8S1810（19.51％，8/41）、D8S1827（9.76％，4/41）、D16S402（19.04％，8/42）、D16S422（21.21％，7/33）、D16S511（53.3

6、3％，24/45）。其中在D16S511位點(diǎn)發(fā)生LOH頻率最高，為53.33％（24/45），依次是D8S261（39.02％，16/41）和D8S499（34.88％，15/43）位點(diǎn)。所有HCC組織中發(fā)現(xiàn)至少一個(gè)位點(diǎn)發(fā)生LOH的總頻率為68.89％（31/45），其中未見在所有位點(diǎn)都出現(xiàn)LOH的病例。
　　2、LOH與HCC的臨床病理特征的關(guān)系對(duì)腫瘤組織染色體8p、16q片段的8個(gè)高度多態(tài)性DNA微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行雜合性丟失（LO

7、H）頻率分析發(fā)現(xiàn)：在病史、HBsAg感染、血清AFP、腫瘤大小、分化程度、伴有肝硬化、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)中的總LOH分布頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；但個(gè)別位點(diǎn)存在差異。在D8S261位點(diǎn)，HBsAg陽(yáng)性感染患者LOH分布高于陰性者（P＜0.028）；在D8S1810位點(diǎn)，伴有肝硬化者的LOH分布高于無(wú)肝硬化者（P＜0.045）；在D16S511和D8S499位點(diǎn)，EdmondsonⅢ-Ⅳ級(jí)以上患者的LOH分布高于Ⅰ-Ⅱ級(jí)（分別為P＜0.003

8、，P＜0.033）。
　　結(jié)論
　　1、本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在D16S511、D8S261和D8S499位點(diǎn)上發(fā)生LOH頻率較高，提示在染色體16q23、8p12與8p22-21.3區(qū)域可能存在與HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的潛在抑癌基因，為下一步篩選新的抑癌基因提供了一定的新線索。
　　2、特定位點(diǎn)的遺傳變異LOH發(fā)生可能與HBsAg陽(yáng)性感染、肝硬化及病理分級(jí)等臨床指標(biāo)相關(guān)，指導(dǎo)臨床早期診療、分子分型及預(yù)后預(yù)警提供了新的理論依據(jù)。