朱砂葉螨酯酶同工酶研究及酯酶cDNA克隆與序列分析.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文朱砂葉螨酯酶同工酶研究及酯酶cDNA克隆與序列分析姓名：曹小芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師：趙志模何林20050501西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要朱砂葉螨酯酶同工酶研究及酯酶aDNA克隆與序列分析論文作者：曹小芳指導(dǎo)教師：趙志模教授何林副教授中文摘要朱砂葉螨是一種極為重要的農(nóng)業(yè)害螨。長(zhǎng)期以來對(duì)害螨的防治主要依賴于使用有機(jī)合成殺蟲殺螨劑，目前在其常發(fā)區(qū)已經(jīng)呈現(xiàn)抗藥譜廣，抗性水平高的特點(diǎn)。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)螨

2、類抗性機(jī)制的研究大都局限于生物化學(xué)水平，而對(duì)螨類抗性的分子生物學(xué)機(jī)制卻知之甚少，這無疑影響了人們對(duì)螨類抗性本質(zhì)的認(rèn)識(shí)和螨類抗性治理措施的制訂。本文以分布廣、食性雜、危害太的重要農(nóng)業(yè)害螨——朱砂葉螨為研究對(duì)象。對(duì)其室內(nèi)阿維菌素汰選品系進(jìn)行抗性測(cè)定和酯酶同工酶研究，結(jié)果表明酯酶活性增強(qiáng)與朱砂葉螨對(duì)阿維菌素產(chǎn)生抗性有關(guān)。在此基礎(chǔ)上，對(duì)朱砂葉螨酯酶基因進(jìn)行了克隆和序列分析，主要研究結(jié)果如下：1朱砂葉螨抗阿維菌素品系選育朱砂葉螨相對(duì)敏感品系采自重

3、慶市北碚區(qū)田問的豇豆苗上已在人工氣候室內(nèi)用盆栽豇豆苗飼養(yǎng)了5年。本研究選用生物源類農(nóng)藥阿維菌素對(duì)朱砂葉螨室內(nèi)品系進(jìn)行抗性選育，經(jīng)過約50余代的篩選，朱砂葉螨對(duì)阿維菌素的抗性倍數(shù)達(dá)1129。從各次毒力回歸線的坡度分析，如果繼續(xù)用藥，朱砂葉螨對(duì)阿維菌素的抗性還會(huì)上升，但抗性發(fā)展速率比較緩慢。2朱砂葉螨抗阿維菌素品系酯酶同工酶研究朱砂葉螨相對(duì)敏感品系和阿維菌素抗性品系酯酶同工酶電泳圖譜顯示，朱砂葉螨敏感品系和阿維菌素抗性品系均至少有4條顯色深

4、淺不一的譜帶，其中E3酯酶顯色最深，且阿維菌素抗性品系的顯色更深，表明在阿維菌素抗性品系中，E3酯酶活性增強(qiáng)與朱砂葉螨對(duì)阿維菌素產(chǎn)生抗性有關(guān)。3朱砂葉螨酯酶基因片段cDNA克隆及序列分析31朱砂葉螨酯酶基因cDNA3’末端克隆在對(duì)不同動(dòng)物酯酶基因進(jìn)行多重比對(duì)后設(shè)計(jì)了一個(gè)RACE引物，克隆得劐了朱砂葉螨酯酶基因的3’末端。所得朱砂葉螨相對(duì)敏感品系酯酶cDNA片斷總長(zhǎng)度。包括引物在內(nèi)為1553bp，除去引物氏度為1507bp，其中編碼區(qū)長(zhǎng)1