青島市櫻花品種的酯酶同工酶及RAPD分析.pdf

1、本試驗(yàn)利用酯酶同工酶及RAPD技術(shù)對(duì)青島市19個(gè)櫻花品種進(jìn)行親緣關(guān)系鑒定和品種分類(lèi)研究。以一年生枝的樹(shù)皮為材料進(jìn)行了19個(gè)櫻花品種的酯酶同工酶研究。為確保櫻花RAPD反應(yīng)的穩(wěn)定性和重復(fù)性，本研究對(duì)基因組DNA的提取方法和RAPD反應(yīng)體系中MgCl<,2>濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量、引物濃度、模板DNA濃度、退火溫度、PCR循環(huán)次數(shù)等影響擴(kuò)增結(jié)果的重要因素進(jìn)行了優(yōu)化。利用優(yōu)化的反應(yīng)體系從60條隨機(jī)引物中篩選出32條，然后進(jìn)行二次篩

2、選用于聚類(lèi)分析，建立了UPGAM系統(tǒng)聚類(lèi)圖。試驗(yàn)主要得到以下結(jié)論： (1)青島市19個(gè)櫻花品種的酯酶同工酶酶譜共有12條酶帶，其中P<,7>為基本酶帶，活性強(qiáng)，為所有供試品種所具有；其他譜帶在各品種間存在缺省情況。 (2)青島市櫻花EST同工酶酶譜的系統(tǒng)聚類(lèi)分析結(jié)果與形態(tài)學(xué)結(jié)果基本一致，證明了種源、重瓣性和花色可作為品種分類(lèi)的重要指標(biāo)，有較好的穩(wěn)定性。 (3)適于櫻花基因組DNA提取的方法為改良的CTAB法。

3、 (4)適于櫻花RAPD擴(kuò)增的最優(yōu)反應(yīng)體系為：20ul總反應(yīng)體系中，1×PCR buffer，2.5 mmol/L MgCl<,2>，0.15 mmol/L dNTP，1U Taq酶，0.2umol/L 10bp隨機(jī)引物，20～30ng模板DNA。最佳擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性4min，94℃變性30s，38℃退火30s，72℃延伸2min，循環(huán)40次，最后72℃延伸10min，12℃保存。 (5)從60條S系列隨機(jī)引物中篩選出

4、32條擴(kuò)增效果較好的引物用于19個(gè)櫻花品種的RAPD擴(kuò)增。32條引物共擴(kuò)增出了533條帶，其中多態(tài)性帶為406條，多態(tài)率達(dá)76.17％。平均每個(gè)引物擴(kuò)增出16條帶，s8和s107最多可達(dá)到21條。 (6)RAPD分析所得聚類(lèi)圖將19個(gè)櫻花品種分為2大類(lèi)群，第1類(lèi)群主要為雜交櫻系；第2類(lèi)群根據(jù)花的重瓣性、枝姿和花色又可分為2個(gè)亞類(lèi)群和3類(lèi)。證明了櫻花的種源、重瓣性、枝姿和花色都可作為資源調(diào)查和品種分類(lèi)的重要指標(biāo)。研究結(jié)果與以前形態(tài)