2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、多酚氧化酶(PPO)多年來一直是國內(nèi)外研究的熱點,對茶葉品質(zhì)的形成起關(guān)鍵作用,然而目前缺乏深入開展PPO單一同工酶的研究。本課題以龍井43號為材料,通過硫酸銨沉淀、離子交換層析、凝膠層析等獲得3個PPO單一同工酶PPOⅠ、PPOⅡ、PPOⅢ,通過MALDI串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀(MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀)對3個同工酶進行了初步鑒定。并對PPOⅡ酶性質(zhì)進行了分析。主要研究結(jié)果如下:
  1、PPO同工酶的獲取
  以緩沖液

2、浸提、硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B離子交換層析、Sephadex G-150凝膠過濾層析等步驟可以有效地分離純化茶樹PPO同工酶。經(jīng)以上各步分離純化,共獲得3個茶樹PPO同工酶,分別為PPOⅠ、PPOⅡ、PPOⅢ,比活力分別為964.63、2325.39、2406.78U/mg,分子量分別約為34kDa、53kDa、85kDa。
  2、茶樹PPO同工酶質(zhì)譜鑒定
  通過質(zhì)譜鑒定PPOⅠ、PPOⅡ

3、、PPOⅢ,經(jīng)檢索得到四種類似的物質(zhì):胞質(zhì)核糖體蛋白、乳酰谷胱甘肽裂解酶、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基蛋白和蛋氨酸合成酶,前兩個為PPOⅠ檢測結(jié)果,后兩個分別為PPOⅡ和PPOⅢ檢測結(jié)果。
  PPOⅠ檢測得到兩種類似物質(zhì):一種類似于茶樹(Camellia sinensis)的胞質(zhì)核糖體蛋白(cytoplasmic ribosomal protein),分子量為17267Da,pI10.26;另一種類似片段來源于水稻

4、中的乳酰谷胱甘肽裂解酶(Lactoylglutathione lyase),分子量為32875Da,pI5.51。
  PPOⅡ類似于存在于茶科植物Franklinia alatamaha中的核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基蛋白(ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit protein),該物質(zhì)分子量為53050Da,pI6.13。PPOⅡ可

5、能與光合作用有關(guān)。
  PPOⅢ類似于存在于茶樹(Camellia sinensis)中分子量為85180Da,pI6.14的蛋氨酸合成酶(methionine synthase)。該物質(zhì)可能與蛋氨酸和葉酸循環(huán)有關(guān),調(diào)節(jié)生物體的生理過程。
  3、PPO同工酶酶學(xué)性質(zhì)研究
  以鄰苯二酚為底物,采用分光光度法對茶葉多酚氧化酶同工酶進行抑制劑、溫度、pH、Cu2+濃度等酶學(xué)性質(zhì)的研究。結(jié)果表明:同工酶PPOⅡ最適pH為6

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