表皮干細(xì)胞對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：表皮干細(xì)胞作為皮膚發(fā)生修復(fù)重建的關(guān)鍵源泉，其生物學(xué)作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過探討表皮干細(xì)胞對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的黏附、增殖等生物學(xué)行為的影響，進(jìn)一步揭示表皮干細(xì)胞在組織修復(fù)過程中可能的生物學(xué)作用。 方法：以Ⅳ膠原作為底物，培養(yǎng)表皮細(xì)胞。利用Ⅳ膠原的快速黏附法分離培養(yǎng)表皮干細(xì)胞。然后利用免疫細(xì)胞化學(xué)分別對(duì)角蛋白19和β1整合素進(jìn)行鑒別。將制備的表皮細(xì)胞懸液接種在包被有Ⅳ膠原24孔板上(共6板)。隨機(jī)分為2組：A組為未棄掉表皮干細(xì)胞組

2、，B組為棄掉表皮干細(xì)胞組。制備好表皮細(xì)胞懸液后，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml，接種于鋪有Ⅳ膠原的24孔板上。溫箱內(nèi)孵育15分鐘后吸掉其中B組的上清液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml后接種在24孔板上繼續(xù)作角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)。分別取培養(yǎng)1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天細(xì)胞每天取4孔在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，取其平均值，繪制生長曲線圖。 結(jié)果：培養(yǎng)出來的表皮干細(xì)胞通過鑒定角蛋白19和β1整合素均有陽性表達(dá)；顯微鏡下可見

3、A組(未棄掉表皮干細(xì)胞組)細(xì)胞在第2天即可看到大部分細(xì)胞貼壁，第3天可見細(xì)胞成集落樣生長，且在第6天時(shí)大部分細(xì)胞連成片；而B組(棄掉表皮干細(xì)胞組)細(xì)胞貼壁相對(duì)緩慢，且形成的集落小而少。通過繪制生長曲線可見A組(未棄掉表皮干細(xì)胞組)細(xì)胞較B組(棄掉表皮干細(xì)胞組)細(xì)胞生長速度要快，并且在各時(shí)像點(diǎn)細(xì)胞數(shù)均高于對(duì)照組。 結(jié)論：表皮干細(xì)胞對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖有正性調(diào)節(jié)作用，表皮干細(xì)胞可能通過分泌某種“表皮干細(xì)胞因子”對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)揮作用