熱休克反應(yīng)對內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞HMGB1表達(dá)、移位及釋放的影響.pdf

1、膿毒癥(sepsis)指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，死亡率高達(dá)30％以上。高遷移率族蛋白-1(high mobility group box 1 protein1，HMGBl)，一種非組蛋白核蛋白，最近被發(fā)現(xiàn)作為一種重要的晚期炎癥介質(zhì)介導(dǎo)了內(nèi)毒素即脂多糖(Lipopo1ysacchride，LPS)的致死效應(yīng)。熱休克反應(yīng)(heat shock

2、 response，HSR)一種高度保守的防御適應(yīng)反應(yīng)，最近發(fā)現(xiàn)具有抗炎作用，如調(diào)控早期炎癥介質(zhì)表達(dá)，降低膿毒癥休克疾病模型動物的死亡率等。但HSR是否對LPS誘導(dǎo)的晚期炎癥介質(zhì)HMGBl的表達(dá)、移位及釋放有影響，目前尚未見報道。已有研究發(fā)現(xiàn)HMGBl在膿毒癥患者的血清中表達(dá)增高，但是在化膿性腦膜炎患者的腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)中呈現(xiàn)何種改變，目前尚未見報道。 本研究采用胞漿胞核組分分離、RT-P

3、CR、Western b1ot、免疫細(xì)胞化學(xué)等方法來研究以上兩個問題。整個實驗分為兩部分：在第一部分我們首先觀察了LPS刺激下小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7內(nèi)HMGBl的表達(dá)、移位及釋放；接著研究了HSR(42.5℃lh，恢復(fù)12h)對LPS誘導(dǎo)的HMGBl移位及釋放的影響。結(jié)果顯示LPS處理24h內(nèi)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7胞內(nèi)HMGBl蛋白水平?jīng)]有變化，但是其mRNA在LPS處理18h開始明顯減少，表明LPS處理24h并不能誘導(dǎo)HM

4、GBl的表達(dá)；LPS處理誘導(dǎo)HMGB1從胞核向胞漿移位。LPS以時間和劑量依賴的方式誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞釋放HMGBl，LPS處理8h，HMGBl開始釋放并持續(xù)增高至24h；熱休克預(yù)處理不僅抑制了LPS誘導(dǎo)的HMGBl從胞核向胞漿移位，而且抑制了LPS誘導(dǎo)的HMGBl的釋放。在第二部分我們檢測了化膿性腦膜炎患兒CSF中HMGBl的蛋白水平，結(jié)果顯示化膿性腦膜炎患兒CSF中的HMGBl水平比對照組明顯升高(p<0.001)。