豬戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因表達(dá)及其基因特異性噬菌體展示肽庫(kù)構(gòu)建.pdf

1、　　本文利用分子生物學(xué)方法對(duì)黑龍江省豬群HE流行情況進(jìn)行了較為詳細(xì)的調(diào)查，并對(duì)豬HEVDQ01株排毒豬進(jìn)行監(jiān)測(cè)，收集其陽(yáng)性血清；以SOE-PCR方法將DQ01ORF2拼接完整，對(duì)其進(jìn)行遺傳演化分析；通過原核表達(dá)獲得重組蛋白，進(jìn)行了免疫反應(yīng)性的鑒定，初步建立了該毒株的ELISA檢測(cè)方法；以pcDNA3.1為載體構(gòu)建了DQ01結(jié)構(gòu)蛋白核酸疫苗，并免疫BalB/C小鼠，獲取免疫血清。采用雙基因噬菌體展示系統(tǒng)，構(gòu)建了DQ01ORF2特異性肽庫(kù)

2、。試驗(yàn)結(jié)果表明DQ01ORF2系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與長(zhǎng)春人戊型肝炎病毒最近達(dá)到87％，氨基酸殘基同源率達(dá)到97％；將拼接完整的ORF2命名為DQ01ORF2，以DNAStar分析其抗原性及水溶性片段，以pET32a為載體，將DQ01結(jié)構(gòu)蛋白部分片段進(jìn)行原核表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE電泳和Westernblot分析，該蛋白得到表達(dá)并具有一定的抗原性，將該蛋白命名為DQ01A四1，以DQ01Ag01為診斷抗原，建立的ELISA方法對(duì)黑龍江省6個(gè)豬場(chǎng)的