甲肝、乙肝病毒基因隨機(jī)肽展示庫的構(gòu)建及肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞受體特異性配體的篩選.pdf

1、大量的研究結(jié)果都已證實(shí)：肝炎病毒的感染是引發(fā)人類肝硬化和原發(fā)性肝癌的主要原因，而原發(fā)性肝癌是5種人類最嚴(yán)重的癌癥之一，全世界每年至少有125萬人死于肝癌。常規(guī)用于治療原發(fā)性肝癌的方法是手術(shù)、放療和化療。但對于肝癌晚期的患者，手術(shù)、放療和化療已經(jīng)沒有意義，甚至?xí)訍夯∏?。因?yàn)?，放療和化療沒有特異性，不僅會消滅癌細(xì)胞，也會殺傷正常細(xì)胞。隨著隨機(jī)肽展示技術(shù)和高效組織器官靶向肽篩選技術(shù)的發(fā)展，肝癌導(dǎo)向治療有可能成為現(xiàn)實(shí)。 本項(xiàng)研究采

2、用DNaseⅠ隨機(jī)酶解及不定向連接T7噬菌體載體兩臂的方法分別構(gòu)建了甲肝病毒和乙肝病毒全基因隨機(jī)肽展示庫。首先用正常肝細(xì)胞株L02和肝癌細(xì)胞株HepG2進(jìn)行數(shù)輪體外親和淘洗，獲得初步富集的親和噬菌體。再用以相應(yīng)細(xì)胞株誘導(dǎo)的荷瘤裸鼠，進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)富集。將最后一輪富集的高親和力噬菌體單克隆化，純化DNA，擴(kuò)增插入片斷，并進(jìn)行插入片斷的序列分析。結(jié)果獲得一條插入片斷的核酸序列及推測的氨基酸序列。為了順利進(jìn)行后續(xù)的研究工作，還需要增加積累單