不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的甲基化差異研究.pdf

1、背景與目的:肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性表型和特征之一，也是導(dǎo)致肺癌患者死亡的主要原因。已有的研究表明，肺癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個多階段、多步驟發(fā)生的復(fù)雜過程，并受肺癌轉(zhuǎn)移抑制基因和肺癌轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因的雙重調(diào)控。因此，研究和闡明調(diào)控肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，具有十分重要的意義。表觀遺傳學(xué)是近年腫瘤分子生物學(xué)機(jī)制研究的熱點。表觀遺傳學(xué)是指DNA序列不發(fā)生變化但基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳改變的學(xué)說，即基因型不變而表型發(fā)生改變，并且這種改變在細(xì)胞發(fā)育和增殖

2、過程中能穩(wěn)定傳遞。DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要組成部分之一，它在維持正常細(xì)胞功能、遺傳印記、胚胎發(fā)育中起著重要作用，尤其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。甲基化在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，包括抑癌基因的高甲基化和癌基因的低甲基化，是腫瘤領(lǐng)域的研究熱點和重點課題。NL9980和L9981是從人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株WCQH29801分離出的具有不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系。L9981細(xì)胞具有高轉(zhuǎn)移性，nm23-H1在該細(xì)胞株中表達(dá)缺失；NL9980

3、具有低轉(zhuǎn)移性，nm23-H1表達(dá)正常。本研究旨在應(yīng)用甲基化芯片雜交技術(shù)來分析具有相同遺傳背景和不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981和NL9980之間基因甲基化的差異，為進(jìn)一步探討基因甲基化在肺癌轉(zhuǎn)移中的分子生物學(xué)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 材料與方法:(1)應(yīng)用TIANamp Genomic DNA提取試劑盒提取L,9981和NL9980細(xì)胞株的基因組DNA，并應(yīng)用超聲破碎儀破碎基因組DNA；(2)應(yīng)用MBD2b對破碎的基因組DNA片

4、段進(jìn)行免疫共沉淀；(3)應(yīng)用LM-PCR擴(kuò)增免疫共沉淀所得DNA片段；(4)應(yīng)用寡核苷酸直接摻入法將cy3和cy5標(biāo)記擴(kuò)增的DNA片段，然后與高通量甲基化芯片進(jìn)行雜交；(5)應(yīng)用GENEPIX4000B掃描儀對甲基化基因芯片(SBC human CHIP)進(jìn)行掃描；(6)應(yīng)用nimblescan軟件分析L998 1和NL,9980中基因甲基化的差異；(7)將L9981細(xì)胞株高甲基化和低甲基化基因上傳到NIH-DAVID和MILANO網(wǎng)站

5、進(jìn)行基因功能聚類分析。 結(jié)果: (1)與NL9980細(xì)胞株比較，L9981細(xì)胞株有97個基因顯示低甲基化，其中25個為已知基因，52個為未知基因；(2)與NL9980細(xì)胞株相比，L9981細(xì)胞株有420個基因顯示高甲基化，其中67個為已知基因，353個為未知基因；(3)在L9981細(xì)胞株中伴有低甲基化的25個已知基因中，與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因有1個(HYAL1)，與侵襲相關(guān)的基因有2個(HYAL1，PXMP2)，與凋亡相關(guān)的基因有4個