甲基硒酸對(duì)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981凋亡和體外侵襲的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的：肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。近20年來，雖然肺癌的基礎(chǔ)研究和臨床診斷治療均取得了明顯進(jìn)步，但是肺癌總的治愈率仍然只有15％左右。因此，研究和開發(fā)新的抗肺癌藥物，尤其是療效好，毒副作用低的抗肺癌藥物已成為肺癌研究領(lǐng)域的重要課題。硒作為一種人體必需的微量元素和天然的防癌抑癌制劑，越來越受到腫瘤學(xué)界的關(guān)注。甲基硒酸作為一種新型的人工合成的硒化合物，以其廣泛的抗癌效應(yīng)和無需體內(nèi)代謝酶轉(zhuǎn)化而直接作

2、用于靶細(xì)胞的特性成為最具潛力的硒化合物抗癌制劑。已有的研究表明，甲基硒酸對(duì)于包括前列腺癌、乳腺癌等多系統(tǒng)腫瘤均有體外增殖抑制作用，其抗癌機(jī)制包括阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)凋亡，抗血管生成，以及抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移等作用。迄今，有關(guān)甲基硒酸對(duì)肺癌是否具有與其他惡性腫瘤相同或相似的抗癌作用，國(guó)內(nèi)外均無報(bào)道。本研究旨在探討MSA對(duì)于人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981是否具有生長(zhǎng)抑制和逆轉(zhuǎn)體外侵襲能力的作用，并試對(duì)其分子機(jī)制作初步探討。 方法：

3、應(yīng)用體外培養(yǎng)技術(shù)，以甲基硒酸（MSA）作用于人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981，以臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并計(jì)算群體倍增時(shí)間；以Boyden小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MSA作用于L9981細(xì)胞株前后體外侵襲力的變化；以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSA作用于L9981細(xì)胞株前后凋亡百分率的變化，并測(cè)定MSA作用于L9981肺癌細(xì)胞株前后凋亡相關(guān)基因，以及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：本研究在國(guó)內(nèi)外首次觀察到：（1）MSA對(duì)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)

4、胞肺癌細(xì)胞株L9981的體外增殖能力具有明顯的抑制作用，并具有明顯劑量依賴性；（2）低濃度MSA對(duì)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981體外增殖能力的抑制效率低于陽性藥物組DDP（2.5gg／ml），但較高濃度（5.0gmol／L和7.5gmol／L）MSA對(duì)L9981細(xì)胞株體外增殖能力的抑制作用與DDP（2.5gg／ml）比較無顯著性差異（P>0.05）；（3）5.0gmol／L和7.51μmol／L MSA均能顯著延長(zhǎng)L9981肺癌細(xì)胞

5、株的群體倍增時(shí)間；（4）MSA能明顯誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株L9981細(xì)胞凋亡，并具有劑量和時(shí)間依賴性；（5）MSA能顯著上調(diào)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981凋亡相關(guān)基因Fas，F(xiàn)asL，Bax的表達(dá)水平；（6）5.0gmol／L MSA能顯著抑制或／和逆轉(zhuǎn)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981的體外侵襲能力，MSA逆轉(zhuǎn)L9981體外侵襲能力的作用顯著高于2.5μg／ml DDP的作用（P=0.000）；（7）5.0gmol／L的MSA能顯著上調(diào)人

6、高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981中侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因E-Cd，Endostatin，MMP-2和VEGF表達(dá)水平，2.5gg／ml的DDP處理L9981肺癌細(xì)胞株僅使MMP-2表達(dá)水平顯著下調(diào)，而對(duì)E-Cd，Endostatin和VEGF表達(dá)水平無明顯影響。 結(jié)論：（1）MSA對(duì)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981的體外增殖具有明顯的抑制作用，并具有劑量依賴性，且5.0gmol／L（0.79gg／ml）對(duì)L9981體外增殖的抑制效率

7、與2.5μg/ml DDP的抑制作用等效；（2）MSA能誘導(dǎo)L9981肺癌細(xì)胞株凋亡，并具有劑量和時(shí)間依賴性；（3）MSA能抑制或/和逆轉(zhuǎn)L9981肺癌細(xì)胞株的體外侵襲能力，且5.0gmol/L（0.79μg/ml）MSA抑制L9981體外侵襲力的作用顯著強(qiáng)于2.5μg/ml DDP的作用；（4）MSA抑制L9981體外增殖，誘導(dǎo)凋亡和逆轉(zhuǎn)其體外侵襲能力的作用可能與MSA顯著上調(diào)L9981肺癌細(xì)胞株Fas、FasL、Bax、Endost