PI3K-PKB信號(hào)通路及其抑制劑wortmannin在大鼠急性胰腺炎相關(guān)腸道損傷中的作用.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis， AP)是臨床上常見的急腹癥之一，常表現(xiàn)為起病急、變化快、病情重、除發(fā)生胰腺病變外，常伴有多器官功能損傷，腸道功能損傷是急性胰腺炎的重要并發(fā)癥之一。腸粘膜屏障受損時(shí)，大量內(nèi)毒素、細(xì)菌釋放入血，引起內(nèi)毒素血癥或菌血癥，加重全身炎癥反應(yīng)，甚至引起多器官功能衰竭。因此，積極預(yù)防和治療腸道損傷已經(jīng)成為急性胰腺炎病情轉(zhuǎn)歸的重要影響因素。腸道損傷主要表現(xiàn)為動(dòng)力障礙，腸管損傷和粘膜屏障功能損害三方面，

2、目前認(rèn)為其機(jī)制主要與腸管炎癥細(xì)胞的浸潤，腫瘤壞死因子(TNF-α)等細(xì)胞因子大量釋放，腸腔細(xì)菌過度繁殖及過量氧自由基產(chǎn)生有關(guān)。磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-kinase， PI3K)是一種與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的第二信使，蛋白激酶B(protein kinase B， PKB)是PI3K的一個(gè)下游作用因子，PI3K/PKB通路是一個(gè)重要的信號(hào)調(diào)控系統(tǒng)，可介導(dǎo)細(xì)胞外信號(hào)引起細(xì)胞反應(yīng)，在炎癥細(xì)胞的活化、趨化、

3、腫瘤的發(fā)生、缺血再灌注及間質(zhì)纖維化等方面發(fā)揮了重要作用。近年來PI3K/PKB信號(hào)通路與胰腺炎的關(guān)系受到越來越多的重視。急性胰腺炎時(shí)，PI3K/PKB信號(hào)通路被激活，進(jìn)一步激活下游作用因子NF-κB，促進(jìn)多種炎癥因子的產(chǎn)生，進(jìn)而活化并募集中性粒細(xì)胞產(chǎn)生更多細(xì)胞因子與炎癥介質(zhì)，引起級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，即所謂的“炎癥因子風(fēng)暴”，誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)，甚至多器官功能衰竭。通常情況下p-PKB可衡量PI3K/PKB信號(hào)通路的活化程度。本實(shí)驗(yàn)通過測定腸道組

4、織中P-PKB及PKB的表達(dá)水平，進(jìn)而研究PI3K/PKB信號(hào)通路與大鼠AP相關(guān)腸道損傷的關(guān)系，同時(shí)應(yīng)用PI3K信號(hào)通路抑制劑wortmannin干預(yù)AP大鼠，觀察其在AP大鼠并發(fā)腸道損傷的作用并研究其可能的機(jī)制。
　　 目的：通過應(yīng)用PI3K特異性抑制劑wortmannin預(yù)處理大鼠AP模型，探討wortmannin在急性胰腺炎相關(guān)腸道損傷中的作用，并研究其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：將健康成年SD大鼠54只隨機(jī)分為

5、對(duì)照組(sham operation SO)、急性胰腺炎(acute pancreatitis AP)組和AP±wortmannin(WAP)組，每組18只，每組又以不同時(shí)間點(diǎn)3h、6h、12h分為三個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只大鼠。以10％的水合氯醛腹腔注射麻醉，取上腹正中切口進(jìn)入腹腔，以無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉近肝門端膽管，然后用加工鈍頭1ml注射器于十二指腸乳頭附近逆行插入胰膽管，以0.2ml/min速度逆行膽胰管注射50g/L?；悄懰徕c制備AP模

6、型，推藥后以左手拇指捏閉胰膽管入十二指腸處，觀察3min，去除動(dòng)脈夾，其中WAP組于造模前4小時(shí)腹腔注射wortmannin(0.35mg/kg)。分別于造模后3h、6h、12h每組處死6只大鼠，下腔靜脈取血，檢測血清淀粉酶、TNF-α(tumour necrosis factor-α)水平、血漿內(nèi)毒素的水平，觀察胰腺和腸道的大體及病理學(xué)改變，并檢測腸道組織髓過氧化物酶(myeloperoxidase， MPO)活性，采用western

7、 blot檢測腸道組織中PKB及P-PKB的表達(dá)水平，觀察PI3K/PKB信號(hào)通路與大鼠AP相關(guān)腸道損傷的關(guān)系，及應(yīng)用wortmannnin預(yù)處理AP大鼠后，上述測量指標(biāo)的變化。
　　 結(jié)果：SO組的各測量指標(biāo)在各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化，與SO組相比，AP組在各時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶、TNF-α水平、血漿內(nèi)毒素及腸道組織MPO活性均顯著升高(P＜0.05)，胰腺、腸道病理損傷亦較SO組明顯加重，中性粒細(xì)胞浸潤增多；WAP組在各時(shí)間點(diǎn)較SO組