Hedgehog信號(hào)通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其對(duì)TNF-α、IL-10的影響.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是臨床常見急腹癥，具有起病急、病情重、變化快等特點(diǎn)，除了胰腺本身病變之外，還可能引起胰腺外器官和組織的損傷，甚至最終或可誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemicinflammatory response syndrome，SIRS)、多器官功能障礙綜合征(multiple-organ dysfunction syndrome，MODS)等而導(dǎo)致死亡。目前，關(guān)于AP發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究

2、很多，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路即為其中重要的一個(gè)方面。大量研究發(fā)現(xiàn)，Hedgehog(Hh)信號(hào)通路作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的新熱點(diǎn)，不僅在動(dòng)物胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化增殖、器官發(fā)育調(diào)節(jié)等生理過程中發(fā)揮著重要作用，還與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有著直接的關(guān)系。但是，目前Hh信號(hào)通路與疾病間關(guān)系的研究大多集中在其異常激活所導(dǎo)致的惡性腫瘤疾病中，如胰腺癌、胃癌、卵巢癌等，而與炎癥性疾病的研究則相對(duì)較少。故本研究擬初步探討Hh信號(hào)通路在AP中的作用及其可能的機(jī)制。

3、　　目的:
　　本研究應(yīng)用Hh信號(hào)通路的特異性激動(dòng)劑Purmorphamine預(yù)處理大鼠AP模型，并通過監(jiān)測(cè)Hh信號(hào)通路對(duì)血清中淀粉酶(Amylase，AMY)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)的水平的影響，初步探討Hh信號(hào)通路的激活對(duì)大鼠AP的作用，并研究其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1、實(shí)驗(yàn)分組:54只清潔級(jí)成

4、年雄性SD大鼠，體重220±20 g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組，n=18)、急性胰腺炎組(AP組，n=18)、Purmorphamine干預(yù)組(Pur組，n=18)，每組再以不同時(shí)間點(diǎn)6h、12h、24h分為三個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只大鼠。
　　2、制造模型:本研究采用L-精氨酸腹腔注射法制造大鼠AP模型。
　　AP組給予腹腔注射20％ L-精氨酸2.5 g/kg，間隔1h注射2次，N組則給予等體積的生理鹽水腹腔注射2次。Pur

5、組于造模前1h給予Purmorphamine溶液0.69 mg/kg腹腔注射1次，另兩組給予等體積的DMSO溶液腹腔注射1次。最后一次腹腔注射后，分別于6h、12h、24 h處死各組大鼠，留取血清及胰腺組織。
　　3、實(shí)驗(yàn)方法:應(yīng)用淀粉酶試劑盒檢測(cè)血清中淀粉酶(amylase，AMY)水平，利用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosi

6、s factor-α，TNF-α)及白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)水平，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timepolymerase chain reaction，Real-time PCR)測(cè)定胰腺組織中Ptch1 mRNA表達(dá)水平。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、血清AMY:在各時(shí)間點(diǎn)，N組血

7、清AMY水平較低且無顯著變化;AP組及Pur組各時(shí)間點(diǎn)AMY水平較N組均顯著升高（P＜0.05），且隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸上升;與AP組相比，Pur組各時(shí)間點(diǎn)血清AMY水平則明顯下降(P＜0.05）。
　　2、血清TNF-α:N組血清TNF-α在各時(shí)間點(diǎn)均無顯著變化，且水平較低;與之相比，AP組和Pur組血清TNF-α水平都出現(xiàn)了明顯升高(P＜0.05);但Pur組與AP組相比，血清TNF-α水平則顯著降低(P＜0.05)。
　　

8、3、血清IL-10:N組血清IL-10水平在各時(shí)間點(diǎn)均較低;AP組和Pur組分別與N組比較，各時(shí)間點(diǎn)血清IL-10均顯著升高（P＜0.05）;應(yīng)用Purmorphamine干預(yù)后，Pur組血清IL-10較AP組在各時(shí)間點(diǎn)均顯著升高（P＜0.05）。
　　4、胰腺組織Ptch1 mRNA:在各時(shí)間點(diǎn)，N組胰腺Ptch1 mRNA均未見明顯表達(dá);AP組和Pur組分別與N組比較，Ptch1 mRNA水平均顯著升高(P＜0.05），且隨時(shí)

9、間呈上升趨勢(shì);由于Purmorphamine的作用，Pur組各時(shí)間點(diǎn)Ptch1 mRNA水平較AP組均進(jìn)一步明顯升高(P＜0.05）。
　　5、AP組及Pur組兩組中不同指標(biāo)間的相關(guān)性檢驗(yàn):將血清TNF-α與血清AMY進(jìn)行相關(guān)性分析，二者呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.704(P＜0.01);將血清IL-10與血清AMY進(jìn)行相關(guān)性分析，二者呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.429（P＜0.01）;將血清IL-10與血清TNF-α進(jìn)行相關(guān)性分析

10、，二者呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.463(P＜0.01);將胰腺組織Ptch1 mRNA與血清IL-10進(jìn)行相關(guān)性分析，二者呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)rs=0.700(P＜0.01);將胰腺組織Ptch1mRNA與血清TNF-α進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果提示二者并無相關(guān)性(rs=-0.129，P=0.454＞0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用L-精氨酸腹腔注射方法可成功復(fù)制大鼠AP模型，為研究Hh信號(hào)通路在大鼠AP中的作用提供了條件。

11、
　　2、AMY是反應(yīng)急性胰腺炎炎癥的重要指標(biāo)，給予外源性Hh信號(hào)通路激動(dòng)劑Purmorphamine后，可引起大鼠AP模型血清AMY水平明顯下降，胰腺損害減輕，促進(jìn)急性胰腺炎的恢復(fù)。
　　3、TNF-α作為關(guān)鍵性的促炎因子，在AP發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，其水平可直接反應(yīng)炎癥嚴(yán)重程度;抗炎因子IL-10則可通過降低血清AMY、抑制包括TNF-α在內(nèi)的炎癥因子等方式在AP的進(jìn)展中起保護(hù)作用。
　　4、應(yīng)用外源性Hh信號(hào)通