RubisCO純化、大小亞基片段克隆與小麥灌漿期蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)研究.pdf

1、　　小麥?zhǔn)俏覈?guó)西北方地區(qū)最重要的糧食作物。然而，隨著近年來(lái)耕地面積不斷下降和人口不斷上升之間的矛盾日益突出，怎樣提高小麥的產(chǎn)量已經(jīng)成了廣大農(nóng)業(yè)工作者迫切需要解決的問(wèn)題。　　目前，很多研究工作都集中在了改良和選育優(yōu)良小麥品種以及提高肥料和水分水平上以期達(dá)到高產(chǎn)的目的，但是這種增產(chǎn)潛力是有限的。因此，本實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)研究在五種栽培模式下蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)狀況，提出了一種比較適合于關(guān)中地區(qū)的栽培模式；占旗葉可溶性蛋白含量50﹪以上的RubisCO

2、在蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)中起重要作用，因此，在本實(shí)驗(yàn)中我們還制備了RubisCO的多抗并克隆了大小亞基片段，為研究其在蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)中的作用奠定基礎(chǔ)。以下是本次實(shí)驗(yàn)獲得的主要結(jié)果：　　1)經(jīng)過(guò)粗提、(NH4)2SO4分段鹽析、凝膠過(guò)濾和離子交換層析四步純化后，得到了純的RubisCO；經(jīng)Native-PAGE電泳顯示只有一個(gè)條帶，SDS-PAGE電泳有兩條帶，為RubisCO的大小亞基，分子量分別為55KD和14。8KD。將純化的RubisCO并制備

3、了多克隆抗體，為后續(xù)工作的開(kāi)展奠定了基礎(chǔ)?！　?)用PCR方法克隆到了大小亞基片段，長(zhǎng)度分別為620bp和313bp。這兩個(gè)片段都是從基因的外顯子中獲得，中間沒(méi)有內(nèi)含子間隔。因此，在后續(xù)工作中既可以用做Southern雜交的探針也可以用做Northern雜交的探針，與其他物種之間存在高度的同源也使得其應(yīng)用更加廣泛?！　?)常規(guī)栽培、秸稈覆蓋、地膜覆蓋、壟溝種植和補(bǔ)灌栽培五種栽培模式中，地膜覆蓋且施氮量為8kg/mu的模式在關(guān)中地區(qū)較

4、其他模式更有優(yōu)勢(shì)。在此種栽培模式下，小麥旗葉蛋白水解酶活性較高，可溶性蛋白和游離氨基酸含量下降徹底，蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)效率高?！　?)增加氮肥用量和土壤含水量有利于小麥葉面積的增大，葉綠素增多，光合作用增強(qiáng)，從而為蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)提供更充足的源?！　?)Western雜交發(fā)現(xiàn)經(jīng)EDTA和PMSF處理后，RubisCO出現(xiàn)19KD、21KD、30KD和32KD四條降解條帶，而經(jīng)Leupeptin處理后只有30KD和32KD兩個(gè)條帶；從而進(jìn)一步證明了