雞催乳素和抑制素α亞基片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)、蛋白純化和鑒定.pdf

1、通過PCR和分子克隆的方法首先將全部粵黃雞催乳素成熟肽cDNA克隆到載體pRSET A的BglⅡ和EcoRⅠ兩克隆位點(diǎn)之間,獲得重組質(zhì)粒pPRL-RSET.家雞抑制素α亞基片段經(jīng)擴(kuò)增后分別被克隆入質(zhì)粒pRSET A和pPRL-RSET的NheⅠ和Xhol兩克隆位點(diǎn)之間,構(gòu)建成重組質(zhì)粒pINB-RSET和pINB-PRL.以上重組質(zhì)粒的構(gòu)建正確性分別由特定引物組合擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物長度、特定限制性內(nèi)切酶消化各重組質(zhì)粒所得產(chǎn)物長度以及對(duì)各質(zhì)粒

2、的測(cè)序結(jié)果得到驗(yàn)證.重組質(zhì)粒pPRL-RSET和pINB-PRL在轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）株后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后所表達(dá)的產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE顯示分別與所預(yù)期的重組蛋白分子量大小相符,兩種融合蛋白均是不溶性的,主要以包涵體的形式存在.當(dāng)O.D<,600>在0.6-0.8之間,IPTG終濃度為0.01mmol/L時(shí),誘導(dǎo)2小時(shí)pINB-PRL可獲得最大的表達(dá)量;加入IPTG至終濃度為0.005mmol/L時(shí),誘導(dǎo)4小時(shí)pPRL-RSE