p100蛋白及其片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:分別將人類p100基因，p100的SN基因片段和TSN片段定向連入pERFP-CI質(zhì)粒，使它們可與紅色熒光蛋白在HeLa細胞內(nèi)融合表達，從而為進一步研究p100蛋白及其片段的定位、功能及與其它蛋白的相互關(guān)系奠定實驗基礎(chǔ)。 方法: PCR分別擴增出p100全長，SN片段和TSN片段基因的序列，定向克隆至真核表達載體pERFP-CI，構(gòu)建相應(yīng)的3種重組質(zhì)粒。將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HeLa細胞，熒光顯微鏡下可觀察紅色熒光融合蛋白

2、表達。 結(jié)果:①PCR法獲得p100基因序列，長度為2659bp，SN基因片段1918bp，TSN基因片段741bp；②將p100全長與pERFP-CI載體分別進行雙酶切得到相應(yīng)的片段，并連接獲得重組質(zhì)粒。將其進行雙酶切鑒定可見p100片段。③將經(jīng)過藍白斑篩選后的重組子經(jīng)雙酶切再與pERFP-CI載體連接獲得重組質(zhì)粒，相同的酶切鑒定得到SN片段和TSN片段；④轉(zhuǎn)染3種重組質(zhì)粒后可觀察到紅色熒光蛋白的分布及表達情況。 結(jié)論

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