沙眼衣原體主要外膜蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)和活性鑒定.pdf

1、沙眼衣原體(Ct)是引起沙眼、非淋球菌尿道炎和許多泌尿生殖道疾病的病原微生物。其18個(gè)血清型都具有一個(gè)主要外膜蛋白(Major Outer MembraneProtein，MoMP)，不僅在介導(dǎo)Ct黏附宿主細(xì)胞的過程中起重要作用，而且本身作為一種重要的免疫原能刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫，而ompA基因是編碼Ct MOMP的結(jié)構(gòu)基因。因此，根據(jù)ompA基因的特異性，制備具有良好免疫原性的MoMP抗原，對(duì)研究Ct的致病機(jī)制、臨床快速診斷

2、Ct感染的試劑盒研發(fā)、肽芯片及疫苗制備等有重要意義。
　　 本文分析了Ct18個(gè)血清型ompA基因的堿基序列，B型ompA基因與其它型別相比，其表達(dá)產(chǎn)物有2-3個(gè)氨基酸的差異，因此確定選用B/TW-5 ompA表位，共62個(gè)氨基酸。并根據(jù)大腸桿菌的偏好密碼子優(yōu)化、設(shè)計(jì)并合成堿基序列，使得擬表達(dá)的目的基因序列能夠較好地與原核表達(dá)系統(tǒng)相匹配，提高表達(dá)效率。通過目的基因片段與pET-41a構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌后，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)

3、，SDS-PAGE分析，得到了分子量約為34KD的重組蛋白，并將選定的表達(dá)株放大培養(yǎng)，采用柱層析方法純化重組蛋白，確定了結(jié)合緩沖液：Na2H PO4：NaH2PO43：2(20mmol/L)，8M/L尿素，5mmol/L咪唑，pH8.0；洗脫緩沖液：Na2H PO4：NaH2PO43：2(20mmol/L)，8M/L尿素，500mmol/L咪唑，pH8.0，分別用5％，10％，15％，20％，25％，洗脫液梯度洗滌樣品，是比較合適的純化