干擾素α和人免疫球蛋白Fc片段融合蛋白的構(gòu)建與表達.pdf

1、基因重組干擾素如IFN-α(IFN-α包括IFNα-2a，IFNα-2b，IFNα-1b等)及其修飾體（如多價干擾素）已經(jīng)作為抗病毒和免疫調(diào)節(jié)類藥物，被廣泛用于臨床，治療多種病毒性疾病和抗腫瘤等。所謂天然的干擾素α（IFN-α）是指細胞經(jīng)過誘導而表達產(chǎn)生的細胞因子，通過信號傳導繼而發(fā)揮抗病毒、抗細胞增殖和調(diào)節(jié)免疫應答作用，然而，作為一個小分子蛋白，IFN-α在血漿中清除的速度比較快，其半衰期僅為數(shù)十分鐘，導致在臨床治療中需要重復多次用藥

2、才能達到治療效果。這樣不僅給患者增加痛苦和經(jīng)濟負擔，還會出現(xiàn)藥物的峰谷現(xiàn)象，難以達到治療效果并容易產(chǎn)生副作用。因此，迫切需要探索一系列增長IFN在體內(nèi)的半衰期的方法。在本研究中，為了延長IFN-α在血漿中的半衰期，利用免疫球蛋白具有在血液循環(huán)中長效半衰期的特性，構(gòu)建了編碼人源IFNα-2b和免疫球蛋白Fc片段的基因重組融合蛋白。同時，對Fc片段中可誘導細胞殺傷活性(包括ADCC和CDC活性)的個別位點進行了改造，以降低免疫球蛋白Fc片段

3、可能導致的副作用。構(gòu)建的融合蛋白既能保持干擾素的活性并帶有天然的N端，又具有抗體的優(yōu)越性，其Fc片段的CH2,CH3區(qū)域可以用于ProteinA的親和層析，為蛋白純化提供了方便；而且保留的抗體鉸鏈link部分使兩個有效分子之間的功能互不影響。為了進一步延長融合蛋白在血漿中的半衰期，通過定點突變的方式對IgG的Fc片段進行改造，使Fc與FcRn結(jié)合能力更強。另外，本研究中還采用了新型的甲醇誘導型酵母表達系統(tǒng)，達到高效和低成本的效果。研究中