RT-PCR結(jié)合AVF技術(shù)研究熱應(yīng)激對(duì)山羊肝臟糖異生的影響及機(jī)理.pdf

1、通過(guò)研究熱應(yīng)激對(duì)反芻動(dòng)物糖異生的影響及機(jī)制，為合理制定緩解反芻動(dòng)物熱應(yīng)激的調(diào)控措施提供理論指導(dǎo)。本試驗(yàn)選擇8只體重相近，體況良好的健康麻城黑山羊隨機(jī)分為兩組，每組4只羊，第一組在空調(diào)控溫保持溫濕指數(shù)≤72的環(huán)境中飼養(yǎng);第二組在溫濕指數(shù)≥72的熱應(yīng)激環(huán)境中飼養(yǎng)。預(yù)試期7天，隨后進(jìn)行3天消化試驗(yàn)。禁食1天后安裝肝靜脈、門靜脈、腸系膜近端、腸系膜遠(yuǎn)端、頸動(dòng)脈血管插管。術(shù)前采頸靜脈血，術(shù)后進(jìn)行連續(xù)飼喂。術(shù)后第5天灌注對(duì)氨基馬尿酸(PAH)，并定

2、點(diǎn)采取血樣，分離血清備測(cè)。術(shù)后30天后進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，采樣備測(cè)。開展以下研究:
　　第一部分全收糞收尿法進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，測(cè)定營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率及氮沉積率。研究結(jié)果顯示熱應(yīng)激可以顯著降低中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維的消化率(P＜0.05);粗蛋白、干物質(zhì)消化率及氮沉積率略有下降，但差異不顯著(P＞0.05)。
　　第二部分安裝動(dòng)-靜脈血插管動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)肝靜脈、門靜脈、頸動(dòng)脈、腸系膜靜脈血漿流量及血糖濃度的變化。結(jié)果顯示肝靜脈、門靜脈、頸

3、動(dòng)脈、腸系膜靜脈四個(gè)部位血糖濃度總體較熱應(yīng)激組高，其中肝靜脈在9:00、13:00時(shí)的血糖濃度顯著高于熱應(yīng)激組(P＜0.05)，其它點(diǎn)均不顯著(P＞0.05)。各組內(nèi)以肝靜脈最高，門靜脈、腸系膜靜脈其次，頸動(dòng)脈血糖最低。對(duì)照組組內(nèi)相比肝靜脈流速最快，門靜脈次之，腸系膜最低。熱應(yīng)激組門靜脈最高，肝靜脈次之，腸系膜最低。
　　第三部分研究熱應(yīng)激對(duì)血液生理生化及胰高血糖素、胰島素、糖皮質(zhì)激素的影響。結(jié)果顯示熱應(yīng)激顯著降低肌酸激酶、總膽固

4、醇的含量(P＜0.05)，對(duì)甘油三酯、堿性磷酸酶的含量無(wú)顯著影響(P＞0.05);熱應(yīng)激組糖皮質(zhì)激素水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，熱應(yīng)激對(duì)胰島素和胰高血糖素水平無(wú)明顯影響(P＞0.05);熱應(yīng)激可以顯著降低門靜脈丙酸流量(P＜0.05)，對(duì)丙酸濃度無(wú)明顯影響(P＞0.05)。
　　第四部分研究熱應(yīng)激對(duì)臟器指數(shù)、肝臟、腎臟及腸道組織形態(tài)的影響。研究結(jié)果顯示熱應(yīng)激對(duì)心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟等器官的臟器指數(shù)無(wú)顯著影響(P＞0.

5、05);熱應(yīng)激使肝細(xì)胞變性而腫脹，使腎小球肥大，腎小管上皮細(xì)胞部分變性、壞死;熱應(yīng)激顯著降低瘤胃乳頭寬度(P＜0.05);熱應(yīng)激對(duì)十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度、隱窩深度及其絨毛高度/隱窩深度比值影響不顯著(P＞0.05)，但卻使空腸粘膜厚度、回腸和盲腸肌層厚度顯著降低(P＜0.05)。
　　第五部分研究熱應(yīng)激對(duì)與生糖作用相關(guān)基因表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示熱應(yīng)激組參與糖異生過(guò)程的關(guān)鍵限速酶磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)、葡萄糖-6

6、-磷酸酶(G-6-P)mRNA的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);熱應(yīng)激組調(diào)控糖異生過(guò)程的重要因子過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α(PGC-1α)mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　第六部分研究熱應(yīng)激對(duì)瘤胃微生物區(qū)系多樣性的影響。研究結(jié)果顯示熱應(yīng)激時(shí)期的條帶數(shù)相對(duì)較多，差異不顯著(P＞0.05)。熱應(yīng)激組與對(duì)照組相比相似性不足50％，說(shuō)明熱應(yīng)激對(duì)瘤胃菌群有一定的影響。
　　綜上所述，在本試驗(yàn)條件

7、下得出以下結(jié)論:當(dāng)環(huán)境溫濕指數(shù)≥72時(shí)，山羊瘤胃微生物多樣性發(fā)生改變，瘤胃乳頭寬度明顯降低，空腸粘膜厚度、回腸和盲腸肌層厚度顯著降低，纖維物質(zhì)的消化明顯受到抑制，門靜脈丙酸流量顯著降低，參與糖異生過(guò)程的關(guān)鍵限速酶磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)mRNA的表達(dá)量顯著低，調(diào)控糖異生過(guò)程的重要因子過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α(PGC-1α)mRNA表達(dá)量顯著降低，揭示熱應(yīng)激可能通過(guò)降低參與糖異