柑桔碎葉病毒RT-PCR檢測(cè)技術(shù)研究及應(yīng)用.pdf

1、由柑桔碎葉病毒(citrustatterleafvirus，CTLV)引起的柑桔碎葉病最早于1962年在隱癥的北京檸檬上發(fā)現(xiàn)。CTLV可感染許多柑桔品種，引起用枳及其雜種作砧木的柑桔樹(shù)嫁接口不親和、植株矮化和葉片黃花。CTLV在我國(guó)分布相當(dāng)普遍，越來(lái)越多地使用感病砧木，會(huì)嚴(yán)重影響我國(guó)的柑桔產(chǎn)業(yè)。CTLV傳統(tǒng)的檢測(cè)方法是指示植物鑒定，但其鑒定周期長(zhǎng)，季節(jié)性強(qiáng)，且需要溫網(wǎng)室等設(shè)施。因此，有必要建立快速穩(wěn)定檢測(cè)CTLV的技術(shù)。本研究參考Hai

2、lstones等[1]建立的CTLV半巢式RT-PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)田間病樹(shù)不同部位和方位取樣進(jìn)行了檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，對(duì)四種感病寄主進(jìn)行了全年檢測(cè)和CTLV部分序列測(cè)定分析，并應(yīng)用該技術(shù)對(duì)“948”項(xiàng)目引進(jìn)的23個(gè)柑桔品種材料和重慶市百萬(wàn)噸工程項(xiàng)目788株過(guò)渡期候選母樹(shù)進(jìn)行了快速鑒定。主要結(jié)論如下： 1、對(duì)同一種感病的寄主材料不同部位取樣檢測(cè)表明：除老皮外均能檢測(cè)到CTLV；對(duì)兩種感病的寄主材料，分別從同一株病樹(shù)的三個(gè)不同方位取樣檢測(cè)表明：

3、除14-2有一個(gè)方位外，均能檢測(cè)到CTLV。說(shuō)明CTLV在植株內(nèi)分布不均勻。 2、對(duì)四種感病的寄主材料進(jìn)行全年檢測(cè)表明：該方法可以全年對(duì)田間的柑桔植株進(jìn)行檢測(cè)；但在8月份，經(jīng)半巢式RT-PCR后電泳條帶較弱。 3、對(duì)“948”項(xiàng)目和重慶市柑桔百萬(wàn)噸工程樣品快速鑒定表明：“948”項(xiàng)目引進(jìn)的23個(gè)柑桔品種材料均呈陰性反應(yīng)，百萬(wàn)噸工程788株候選母樹(shù)中有21株呈陽(yáng)性反應(yīng)，765株呈陰性反應(yīng)。 4、該方法可對(duì)甜橙類(lèi)、柚