重組畢赤酵母產(chǎn)S-腺苷蛋氨酸的發(fā)酵條件優(yōu)化及其分離提取.pdf

1、S-腺苷蛋氨酸(SAM)是L-蛋氨酸的活性形式，具有轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)氨丙基、轉(zhuǎn)硫基的作用，它對(duì)治療肝病、抑郁癥、關(guān)節(jié)炎等疾病具有較好的療效，且副作用小。國(guó)內(nèi)對(duì)SAM的研究起步較晚，因發(fā)酵水平限制、分離純化成本高及其不穩(wěn)定性，到目前為止國(guó)內(nèi)仍未能工業(yè)化生產(chǎn)SAM，市場(chǎng)上用于治療的SAM產(chǎn)品全部依賴于進(jìn)口。
　　 針對(duì)SAM的低產(chǎn)現(xiàn)狀，本論文首先建立了利用HPLC-UV測(cè)定發(fā)酵過程SAM濃度的方法，對(duì)HPLC-LN法檢測(cè)SAM含量的色譜條

2、件進(jìn)行優(yōu)化，最佳色譜條件：流動(dòng)相為0.01mol/L甲酸銨(甲酸調(diào)pH3.5，0.22μm水膜過濾)：甲醇=97:3，流速：0.6 mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm。同時(shí)還建立了利用自制甲醇傳感器檢測(cè)發(fā)酵液中甲醇濃度的兩種方法：尾氣測(cè)量法及硅膠管測(cè)量法。尾氣測(cè)量法響應(yīng)時(shí)間短、檢測(cè)方便；硅膠管測(cè)量法以0.1mL/min氮?dú)鉃檩d氣，穩(wěn)定性良好。
　　 其次，在搖瓶發(fā)酵的基礎(chǔ)上考察了L-蛋氨酸及甲醇濃度對(duì)重組畢赤酵母發(fā)

3、酵生產(chǎn)SAM的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，L-蛋氨酸濃度及甲醇濃度對(duì)重組畢赤酵母發(fā)酵生產(chǎn)SAM有顯著的影響。在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加7.5 g/L L-蛋氨酸，SAM產(chǎn)量最高，達(dá)到0.81 g/L。利用甲醇傳感器監(jiān)測(cè)發(fā)酵過程甲醇濃度，甲醇濃度在10-30 g/L之間，最有利于SAM的生產(chǎn)，其中在15 g/L甲醇濃度下獲得的SAM產(chǎn)量最高，達(dá)到1.41 g/L，相比每隔24 h補(bǔ)加1%甲醇的對(duì)照組，SAM產(chǎn)量提高了21%。
　　 進(jìn)一步在7L發(fā)

4、酵罐上對(duì)甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基的流加方式進(jìn)行了優(yōu)化。7L發(fā)酵罐對(duì)甲醇誘導(dǎo)階段補(bǔ)加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基的研究結(jié)果表明，流加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基對(duì)SAM的產(chǎn)量有影響，在發(fā)酵過程流加10%(w/v)甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基，SAM產(chǎn)量最高，達(dá)到6.09 g/L。在甲醇誘導(dǎo)的不同時(shí)間段，分別流加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基，SAM產(chǎn)量得到進(jìn)一步提高，達(dá)到9.79g/L。
　　 最后，對(duì)所收