重組巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)生產(chǎn)還原型谷胱甘肽條件及其分離純化的研究.pdf

1、γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸(γ-L-cysteinglycine，glutathione，簡(jiǎn)稱(chēng)GSH)是重要的三肽化合物，其主要工業(yè)生產(chǎn)途徑是通過(guò)微生物發(fā)酵進(jìn)而提取，并被廣泛用于臨床疾病的治療和其他方面。國(guó)內(nèi)外關(guān)于GSH的生產(chǎn)及其應(yīng)用已經(jīng)有了一定的研究，但其工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)一直被國(guó)外極少數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家壟斷著，國(guó)內(nèi)自發(fā)研制的GSH產(chǎn)量和純度都相對(duì)較低，還尚未實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，從而造成GSH的市場(chǎng)價(jià)格居高不下，影響了GSH的推廣和應(yīng)用。本文

2、通過(guò)大量的試驗(yàn)研究，采取以下途徑實(shí)現(xiàn)了GSH的高產(chǎn)和高純度，為實(shí)現(xiàn)GSH的國(guó)內(nèi)工業(yè)化生產(chǎn)提供理論參考。 首先，本文通過(guò)研究酵母細(xì)胞中含硫物質(zhì)的代謝過(guò)程，改造了其代謝途徑。確定了適宜的培養(yǎng)基：20g/L甘油，10g/L酵母膏，20g/L蛋白胨，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，13.4g/LYNB，4×10-4g/L生物素，0.05mol/LL-cys；確定了客觀(guān)培養(yǎng)條件：溫度為28℃-30℃、溶氧充分、初始pH為6.0；在此基礎(chǔ)上

3、，經(jīng)過(guò)5天的發(fā)酵，GSH產(chǎn)量可達(dá)到6.0g/L，實(shí)現(xiàn)了GSH的高產(chǎn)量。 然后，根據(jù)GSH主要分布在微生物細(xì)胞胞內(nèi)，并可通過(guò)溫度或有機(jī)物改變細(xì)胞膜的通透性或破壞細(xì)胞壁將其釋放出來(lái)的特點(diǎn)，并利用GSH等電點(diǎn)在5.93左右，使其在酸性條件下帶正電荷，這樣GSH將與陽(yáng)離子樹(shù)脂進(jìn)行離子交換而被樹(shù)脂吸附，從而將GSH與其他雜質(zhì)分離。此外，為了獲得更精制的產(chǎn)品，本實(shí)驗(yàn)還把超濾、納濾等技術(shù)引入到分離純化工藝中，使GSH的收率達(dá)到了90％，純度也