畢赤氏酵母發(fā)酵液中重組人血清白蛋白分離純化工藝的初步研究.pdf

1、重組人血清白蛋白是血源蛋白的一種替代品，生理功能與人血清白蛋白相同，因具有不攜帶傳染性病毒的優(yōu)點而受到廣泛的關注。目前重組人血清白蛋白主要通過基因重組畢赤氏酵母發(fā)酵產(chǎn)生，由于發(fā)酵過程中會產(chǎn)生許多雜質(zhì)，因此從發(fā)酵液中分離、純化目標產(chǎn)物是重組人血清白蛋白產(chǎn)業(yè)化的重要環(huán)節(jié)。
　　本文以畢赤氏酵母重組人血清白蛋白的發(fā)酵液為研究對象，采用膜分離、層析等技術(shù)進行重組人血清白蛋白的分離工藝研究。分離純化工藝路線為：發(fā)酵液離心處理→加熱滅活上清液

2、中的蛋白酶→初級超濾分離→二級超濾分離→吸附脫色→陽離子交換層析→陰離子交換層析。其主要的研究結(jié)果如下：
　　(1)重組人血清白蛋白上清液超濾分離工藝研究。
　　重組人血清白蛋白分子量在67kD左右，先采用分子質(zhì)量80 kD的膜除去分子質(zhì)量大于67kD的雜質(zhì)，再用分子質(zhì)量30kD膜除去分子質(zhì)量小于67kD的雜質(zhì)。超濾分離最佳操作壓力為0.15MPa，最佳操作pH值為7.0。重組血清白蛋白的純度由2％提升到12%，目標物得到初

3、步分離。
　　(2)重組人血清白蛋白超濾液吸附脫色工藝研究。
　　通過靜態(tài)吸附實驗得到，大孔樹脂LS-305和LS-610B的吸附容量分別為68.0△AV·g-1和78.0△AV·g-1，蛋白損失率分別為3.32%和3.39%；且實驗數(shù)據(jù)的擬合得知，Langmuir模型的相關系數(shù)分別為0.9602及0.9761，二階動力學模型的相關系數(shù)分別為0.9877及0.9975。通過動態(tài)吸附實驗，當料液pH值為6.0，流量40mL·h

4、-1，進料體積200mL（大孔樹脂裝柱量為20mL）時，濾液中色素的脫除率可以達到81.5%，而重組人血清白蛋白的損失率為3%。
　　(3)重組人血清白蛋白脫色液層析純化工藝研究。
　　通過陽離子交換層析實驗得到，在平衡緩沖液的pH值為3.7，及洗脫緩沖液的pH值為5.9、NaCl濃度為0.1mol·L-1的條件下，重組人血清白蛋白純化的純度達到71%。通過陰離子交換層析實驗得到，在洗脫緩沖液的pH值為7.6、NaCl濃度為