利用釀酒酵母生物合成谷胱甘肽及其分離純化的初步研究.pdf

1、谷胱甘肽是一種重要的生物活性物質(zhì)，不僅廣泛應用于醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域，而且作為食品添加劑具有廣泛的應用前景。利用微生物細胞進行生物合成是其主要生產(chǎn)方式。 為進一步提高酵母細胞生物合成谷胱甘肽的能力，選用一株具有較高谷胱甘肽合成活性的釀酒酵母SaccharomycescerevisiaeTB6，結(jié)合酵母細胞酶促合成GSH的活性測試，通過單因素試驗和正交試驗研究培養(yǎng)基組成對細胞生長及谷胱甘肽合成酶系活性的影響。在優(yōu)化培養(yǎng)基組成條件下，酵

2、母細胞生物量及谷胱甘肽合成酶系活性均得到提高，搖瓶試驗中酶活力穩(wěn)定在9.02mg(GSH)/克濕細胞，30L發(fā)酵罐中酶活力亦高達8.56mg(GSH)/克濕細胞。 應用卡拉膠與魔芋粉混合載體固定高活力的酵母細胞，催化合成谷胱甘肽。并對固定化細胞條件和固定化細胞生物合成的反應條件進行初步探索。實驗結(jié)果表明：反應液pH值7，反應溫度37℃，磷酸鹽緩沖液0.15mol/L的條件下，固定化細胞具有較高的GSH合成酶活力。 對生物

3、合成反應液中谷胱甘肽的分離作了初步研究，考察了不同pH溶液中還原型谷胱甘肽的氧化情況。并對離子交換法提取谷胱甘肽的提取條件進行了初步研究，確定了提取工藝條件：上柱最適pH為3.0，洗脫用HCl濃度為1mol/L，洗脫速度為30ml/min。 在論文的實驗研究過程中，為滿足普通實驗室的需要，工作中探索建立了一種快速簡便的分光光度分析法，適用于生物酶催化合成反應溶液中與半胱氨酸共存的還原型谷胱甘肽含量測定。樣品在室溫，堿性條件下與3