釀酒酵母中β-胡蘿卜素生物合成研究.pdf

1、釀酒酵母作為一種食用安全性的模式生物，已成為生物合成天然產(chǎn)物的首選宿主細(xì)胞。β-胡蘿卜素因其高效抗氧化性和高附加值的特點(diǎn)備受人們關(guān)注。本文利用合成生物學(xué)的方法，引入不同來源β-胡蘿卜素合成基因，旨在提高釀酒酵母中β-胡蘿卜素的產(chǎn)量，具體工作如下:
　　1、在菌株InvSc1-GAB開始發(fā)酵后12 h、18h、24 h添加麥角固醇抑制劑酮康唑，使其終濃度為30 mg·L-1。在發(fā)酵18h后添加酮康唑，實(shí)驗(yàn)組的β-胡蘿卜素的產(chǎn)量較對(duì)照

2、組增長(zhǎng)了20％，最高產(chǎn)量為20 mg·L-1。
　　2、利用FMDV2A序列連接途徑中所有基因，實(shí)現(xiàn)其在同一讀碼框中的表達(dá)。構(gòu)建菌株InvSc1-2A-YB IE、InvSc1-2A-BYIE、InvSc1-2A-YBIG及InvSc1-2A-BYIG，實(shí)現(xiàn)了歐文氏菌來源基因的表達(dá)及不同來源牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合成酶基因的替換。
　　3、優(yōu)化FMDV2A序列，構(gòu)建菌株InvSc1-YBIE(2A)，InvSc1-YBIE(

3、2A)/pR-t-2A-i,InvSc1-IE-YB(2A),InvSc1-ABG(2A),InvSc1-AEB(2A)。通過優(yōu)化連接順序，導(dǎo)入上游限速酶基因，提高了β-胡蘿卜素表達(dá)能力;通過比較歐文氏菌及三孢布拉氏霉菌的牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合成酶基因crtE和ggps，確定crtE的表達(dá)能力更強(qiáng)。
　　4、在菌株InvSc1-AEB(2A)的發(fā)酵過程中探究最適培養(yǎng)基、最適誘導(dǎo)時(shí)間。通過菌體生長(zhǎng)情況及產(chǎn)量的比較，確定使用SD選擇