喙果絞股藍(lán)總黃酮提取、分析及其抗氧化活性研究.pdf

1、本論文對(duì)鎮(zhèn)江地區(qū)7、8、9、10、11月份采集的喙果絞股藍(lán)黃酮類成分進(jìn)行初步研究。首先建立了喙果絞股藍(lán)總黃酮含量的測定方法,并結(jié)合響應(yīng)面分析,研究喙果絞股藍(lán)的總黃酮提取工藝,并探索了不同月份喙果絞股藍(lán)總黃酮的含量變化；建立了RP-HPLC同時(shí)測定喙果絞股藍(lán)中蘆丁和槲皮素含量的方法,研究了不同月份喙果絞股藍(lán)中蘆丁和槲皮素的含量變化；考察了不同月份喙果絞股藍(lán)總黃酮的體外抗氧化活性,最后研究對(duì)喙果絞股藍(lán)中黃酮類化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步鑒定。具體研究

2、結(jié)果如下:
　　 (1)建立了喙果絞股藍(lán)黃酮類成分含量測定紫外分析方法,建立了蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線,C=0.1932A-0.0253,相關(guān)系數(shù)R2為0.9992,線性關(guān)系良好,線性范圍在0.0198mg／mL～0.119 mg／mL之間,該方法準(zhǔn)確、簡單、重復(fù)性好,可用于喙果絞股藍(lán)總黃酮含量測定。
　　 (2)研究了喙果絞股藍(lán)總黃酮提取工藝,首先利用單因素試驗(yàn)篩選初步的優(yōu)化提取因素,提取溶劑80％乙醇、提取溫度80℃、提取時(shí)間1

3、50 min、提取料液比1:40、提取次數(shù)2次。通過響應(yīng)面分析法,回歸擬合程度好(P=0.0421<0.05),相關(guān)系數(shù)r=0.9810,軟件模擬喙果絞股藍(lán)總黃酮提取的最佳工藝條件為:乙醇濃度80.11％、提取溫度80.59℃、提取時(shí)間147.67 min、料液比為1:40、提取兩次?？紤]實(shí)際操作,將喙果絞股藍(lán)的最佳提取條件為:乙醇濃度80％、提取溫度81℃、提取時(shí)間148 min、料液比為1:40、提取兩次。
　　 (3)7、

4、8、9、10、11月份的喙果絞股藍(lán)總黃酮含量隨月份變化而變化,,各月總黃酮含量依次為0.96％、1.54％、1.24％、1.04％、0.64％,其中8月的總黃酮含量最大,為1.54％,11月份的總黃酮的含量最低,為0.64％,各月份總黃酮含量差異較大。
　　 (4)建立RP-HPLC同時(shí)測定喙果絞股藍(lán)中蘆丁、槲皮素的方法,流動(dòng)相條件為,甲醇-0.4％磷酸水溶液梯度洗脫(0～20 min,40％:60％,20～60 min,50％

5、:50％,60～75 min,60％:40％,75～90 min,70％:30％,v／v)；檢測波長:364 nm；流速:1 mL／min；柱溫:常溫。該方法簡便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好,為喙果絞股藍(lán)質(zhì)量控制提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　 (5)7、8、9、10、11月份喙果絞股藍(lán)中蘆丁、槲皮素的含量隨月份變化而變化,具有動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,呈先升高后下降的趨勢(shì),蘆丁在8月份時(shí)含量最高,平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)5.54 mg／g,槲皮素在9月份時(shí)含量較高,平

6、均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)0.81.mg／g,各月份含量差異較大。
　　 (6)7、8、9、10、11月份喙果絞股藍(lán)總黃酮具有抗氧化活性,7～11月喙果絞股藍(lán)總黃酮消除超氧陰離子自由基(O2-·)能力,隨著供試品濃度的增大而增加,半消除率IC50分別為0.58 mg／mL、0.407 mg／mL、0.48 mg／mL、0.477 mg／mL、0.534 mg／mL,8月份消除能力最高,7月份最低；消除羥基自由基(·OH)能力隨著供試品濃度的增

7、加而增大,半消除率IC50分別為0.495 mg／mL、0.469 mg／mL、0.378 mg／mL、0.427 mg／mL、0.413 mg／mL,9月份消除能力最高,7月份最低；消除1,1-二苯基-2-苦苯腈自由基(DPPH·)能力隨著供試品濃度的增加而增大,半消除率IC50分別為0.57 mg／mL、0.513 mg／mL、0.478 mg／mL、0.543 mg／mL、0.619mg／mL,9月份消除能力最高,11月份最低；還

8、原能力隨著供試品濃度的增加而增大,當(dāng)供試樣品濃度為0.1.25 mg／mL,各月份吸光度值依次分別為0.274、0.296、0.257、0.372、0.247,10月份還原能力最高,11月份最低。
　　 (7)通過黃酮類化合物的顏色反應(yīng)初步鑒定喙果絞股藍(lán)中黃酮類化合物可能存在的成分:游離的黃酮類或黃酮苷、黃酮醇類、2-OH查耳酮或5-OH黃酮類。通過與蘆丁、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,TLC展開劑為氯仿:甲醇:甲酸=8.8:1:0.1時(shí)能