產(chǎn)AmpC酶的大腸埃希菌分子流行特征及PBP4在其耐藥機(jī)制中作用的探討.pdf

1、目的：
　　 研究上海市第六人民醫(yī)院產(chǎn)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶(AmpC酶)大腸埃希菌（Escherichia coli，E.coli）的分子流行特征；探討青霉素結(jié)合蛋白4(penicillin-binding protein 4，PBP4)在產(chǎn)AmpC酶的E.coli耐藥機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 1．使用頭孢西丁篩選法初步篩選產(chǎn)AmpC酶的E.coli，對(duì)初篩陽(yáng)性的E.coli進(jìn)行頭孢西丁三維試驗(yàn)及多重P

2、CR方法進(jìn)一步篩選產(chǎn)AmpC酶的E.coli;
　　 2．通過(guò)多重PCR方法對(duì)34株產(chǎn)AmpC酶的E.coli進(jìn)行系統(tǒng)分型；
　　 3．采用多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)技術(shù)對(duì)E.coli進(jìn)行分子分型；
　　 4.PCR法擴(kuò)增編碼非必需PBPs基因；
　　 5．實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)E.coli中編碼PBP4基因dacB和編碼AmpC基因ampC的轉(zhuǎn)錄

3、情況；
　　 6.MIC法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性；
　　 7．克隆dacB基因并轉(zhuǎn)化入E.coli ATCC25922中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)重組子的dacB mRNA和ampC mRNA表達(dá)水平并比較轉(zhuǎn)化前后MIC值。
　　 結(jié)果：
　　 1.1783株E．coli中頭孢西丁初篩陽(yáng)性菌株共299株，其中頭孢西丁三維試驗(yàn)陽(yáng)性共56株，再經(jīng)多重PCR篩選后共收集到產(chǎn)AmpC酶的E.coli34株；

4、r>　　 2.34株E.coli系統(tǒng)分型共分為四個(gè)群，其中A群6株占17.64％，B1群5株占14.71%，B2群5株占14.71%，D群18株占52.94%;
　　 3.MLST得到了14個(gè)序列型(Sequence type，ST)，其中包含1個(gè)未知的ST；共得到6個(gè)己知序列型克隆系（ST clonal complexes，ST Cplx），其中ST38克隆系最多，占總數(shù)的17.65%;
　　 4．基因dacB、da

5、cA、dacC、ampH、ampC和pbpG經(jīng)PCR擴(kuò)增后均為陽(yáng)性；
　　 5．實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)得26株E.coli dacB mRNA高表達(dá)，占76.47%，8株E.coli中dacB mRNA低表達(dá)，占23.53%，對(duì)高表達(dá)組和低表達(dá)組中ampC基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，得P=0.011差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即在dacB mRNA高表達(dá)組中ampC的轉(zhuǎn)錄水平高于dacB mRNA低表達(dá)組；
　　

6、6.dacB mRNA高表達(dá)組中菌株的藥物敏感率相對(duì)較低；
　　 7．重組子中ampC轉(zhuǎn)錄水平有所提高，對(duì)藥物的耐藥性也有所增加且主要表現(xiàn)在第一代頭孢菌素和第二代頭孢菌素。
　　 結(jié)論：本研究中產(chǎn)AmpC酶的E．coli系統(tǒng)發(fā)育群主要集中于D群；屬于14個(gè)不同的序列型，ST38占總數(shù)最多，其中5個(gè)攜帶DHA菌株屬于ST131/B2克隆株；本研究中dacB mRNA高表達(dá)組中ampC轉(zhuǎn)錄水平高于低表達(dá)組，推測(cè)E.coli臨