基層醫(yī)院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌常見基因型及喹諾酮類耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的：
　　了解本地區(qū)基層醫(yī)院臨床分離的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases, ESBLs)大腸埃希菌常見ESBLs基因型的分布情況，并結(jié)合其對(duì)氟喹諾酮類的耐藥情況探索本地區(qū)該菌染色體和質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮耐藥機(jī)制，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.收集2014年3月至2015年3月基層醫(yī)院臨床送檢的各類標(biāo)本中分離得到的大腸埃希菌，采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)

2、產(chǎn)ESBLs菌株，通過全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)菌株的藥敏結(jié)果。
　　2.用PCR法檢測(cè)blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9和blaSHV基因，每種基因型隨機(jī)選擇10株菌，對(duì)其PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序、比對(duì)及分析其基因亞型。
　　3.隨機(jī)抽取20株對(duì)氟喹諾酮類耐藥的上述產(chǎn) ESBLs菌株，用 PCR法擴(kuò)增gyrA/gyrB/parC/parE基因，所獲得的PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序，測(cè)序結(jié)果通過 b

3、last比對(duì)及分析確定其突變位點(diǎn)；同時(shí)PCR法檢測(cè)50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中qnrA、qnrB、qnrS和aac(6')-Ib-cr質(zhì)?；驍y帶情況，并對(duì)陽(yáng)性PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序。
　　研究結(jié)果：
　　1.從臨床送檢的114株各類標(biāo)本中分離得到產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株50株，占總數(shù)的43.9％（50/114）。50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)阿莫西林、哌拉西林、頭孢噻吩、頭孢呋辛100%耐藥；對(duì)左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥

4、率分別為70%和80%；對(duì)頭孢噻肟、復(fù)方新諾明、慶大霉素和氨曲南呈較高耐藥率；但普遍對(duì)β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方制劑、碳青霉烯類、阿米卡星和頭孢西丁有較高敏感性，菌株對(duì)它們的耐藥率除阿莫西林/克拉維酸為24%外，其余均在10%以下。
　　2.50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中有46株（92%）攜帶blaCTX-M基因；當(dāng)中33株（66%）攜帶blaCTX-M-9亞群基因，19株（38%）攜帶blaCTX-M-1亞群基因，6株同時(shí)含上述兩種

5、亞群 blaCTX-M基因。未檢測(cè)出 blaCTX-M-2、blaSHV型基因。經(jīng)部分測(cè)序， CTX-M-1亞群和CTX-M-9亞群分別以CTX-M-15和CTX-M-14亞型為主。
　　3.在隨機(jī)選取的20株對(duì)喹諾酮耐藥的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株中，20個(gè)菌株的GyrA83和87位均發(fā)生變異；19株菌ParC發(fā)生80位變異、3株發(fā)生84位變異；9株P(guān)arE發(fā)生458位變異、1株發(fā)生445位變異；未發(fā)現(xiàn)gyrB突變位點(diǎn)。50株產(chǎn)E

6、SBLs大腸埃希菌中有10株菌至少攜帶一種質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥（plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR）基因，當(dāng)中4株攜帶qnrS基因，8株攜帶aac(6')-Ib-cr基因，2株同時(shí)攜帶上述兩種質(zhì)粒基因，未檢出qnrA和qnrB基因；攜帶qnr基因的菌株均同時(shí)產(chǎn) CTX-M型 ESBL，8株攜帶 aac(6’)-Ib-cr基因菌株中有7株同時(shí)產(chǎn)CTX-M型ESBLs。
　　結(jié)論：<

7、br>　　1.產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌在本地區(qū)基層醫(yī)院檢出率較高，通常為多重耐藥菌，但普遍對(duì)β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方制劑、碳青霉烯類、阿米卡星和頭孢西丁有較高敏感性。
　　2.本地區(qū)基層醫(yī)院存在一定數(shù)量CTX-M型ESBLs，以CTX-M-9亞群所占比例大，CTX-M-1亞群次之。
　　3.本地區(qū)基層醫(yī)院產(chǎn) ESBLs大腸埃希菌產(chǎn)生的氟喹諾酮類耐藥與菌體靶位基因變異機(jī)制有關(guān)；這些耐藥菌株中不僅在常見的gyrA和parC基因出現(xiàn)突