40株PMQR基因陽性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究.pdf

1、第一部分:PMQR基因陽性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性分析
　　目的:了解臨床分離含質(zhì)粒介導的喹諾酮類耐藥基因(PMQR)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對體外抗生素的敏感實驗和檢測產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamasesESBLs)株陽性率,了解PMQR基因陽性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs菌株分布及其表型。
　　菌株來源:40株含PMQR基因臨床分離株(21大腸埃希菌和19株肺炎

2、克雷伯菌)采用全自動微生物分析儀對標本進行重新鑒定。包括2株qnrA、3株qnrB4、9株qnrS1,2株同時包含有qnrA和qnrS1,19株aac(6′)-Ib-cr,3株qepA及2株同時包含有qepA和aac(6′)-Ib-cr,均收集于2008-2009年自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科。大腸埃希菌ATCC25922為質(zhì)控菌株,肺炎克雷伯菌ATCC700603為產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶株。方法:根據(jù)2009年美國臨床與實驗室標準委員

3、會推薦的的標準,采用瓊脂對倍稀
　　釋法對安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科收集的40株含PMQR基因的大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌對臨床14種抗菌藥物的藥物敏感實驗。雙紙片確證實驗檢測ESBLs并分析其耐藥表型。對PMQR陽性的菌株進行轉(zhuǎn)移接合實驗,驗證PMQR與blaESBLs基因的轉(zhuǎn)移性;同時對接合子進行藥敏實驗。
　　結果:MIC試驗顯示,除了對多種喹諾酮類抗菌藥物顯著耐藥外,40株臨床分離含PMQR基因的菌株還具有ESBL

4、s的表型,對青霉素類(哌拉西林)、第一代頭孢菌素(頭孢唑啉)、第二代頭孢菌素(頭孢呋辛)、第三代頭孢菌素中的頭孢噻肟及頭孢他啶顯示耐藥。經(jīng)表型確證試驗,40株細菌均為產(chǎn)ESBLs菌株。
　　與受體菌相比,100％的接合子對頭孢噻肟的MIC增長了32-1024倍,43.4%(13/30)的接合子對頭孢他啶的MIC增長了2-256倍,16.7%(5/30)的接合子對頭孢吡肟的MIC增長了4-128倍。53.3%(16/30)的接合子對

5、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的MIC分別增長了8-128倍和2-128倍。一株原菌對美洛培南耐藥,接合子MIC雖然顯示敏感,但與受體菌相比,仍增長了8倍。90%或以上的接合子對慶大霉素和阿米卡星的MIC分別增長了64-256和2-128倍。接合子藥敏結果顯示,β內(nèi)酰胺類耐藥常與其他抗菌藥物耐藥被共同轉(zhuǎn)移,如喹諾酮類,氨基糖苷類及單環(huán)內(nèi)酰胺類。
　　結論:含PMQR基因的菌株除了對多種喹諾酮類抗菌藥物顯著耐藥外,常具有產(chǎn)ESBLs的表型,對

6、青霉素類(哌拉西林)、第一代頭孢菌素(頭孢唑啉)、第二代頭孢菌素(頭孢呋辛)、第三代頭孢菌素中的頭孢噻肟及頭孢他啶耐藥及氨基糖甙類等常用抗菌藥物耐藥,應加強耐藥性監(jiān)測和防治。
　　第二部分:PMQR基因陽性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs基因的檢測與分子流行病學研究
　　目的:了解40株臨床分離含質(zhì)粒介導的喹諾酮類耐藥基因(PMQR)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中編碼超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的基因型別,及與PMQR

7、基因在本地區(qū)共同傳播的流行現(xiàn)狀和耐藥特征。
　　方法:用煮沸法提取細菌總DNA,用聚合酶鏈反應(PCR)方法擴增ESBLs基因,PCR擴增產(chǎn)物分別進行雙向序列分析,測序結果在Genbank上比對測序結果,明確blaESBLs基因型;應用ERIC-PCR技術分析PMQR陽性菌株克隆流行傳播情況,進行同源性分析。
　　結果:PMQR陽性菌株中blaESBLs基因型分布詳見表2,40株臨床分離含PMQR基因大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌

8、中共有24株(24/40,60%)檢測出blaESBLs基因,主要是CTX-M-9組和CTX-M-1組(見圖1),檢出率分別為35%(14/40)和27.5%(11/40)。45%(18/40)的菌株同時攜帶兩種或兩種以上的β內(nèi)酰胺酶基因。大腸埃希菌中最常見的blaESBLs基因為CTX-M-14(5/21,23.8%),其次為CTX-M-15(2/21,9.5%);肺炎克雷伯菌中最常見的blaESBLs基因為CTX-M-3(4/19,

9、21%)與CTX-M-65(3/19,15.8%)。大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌中廣譜β內(nèi)酰胺酶TEM-1型的檢出率分別達到42.9%(9/21)、57.9%(11/19);肺炎克雷伯菌中SHV型ESBLs僅檢出SHV-12與SHV-26型各1株,余均為廣譜β-內(nèi)酰胺酶SHV-1及SHV-11型。ERIC-PCR結果顯示菌株間沒有一致條帶,不屬于同一血清型。
　　結論:本地區(qū)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌存在PMQR與blaESBLs基因的