氨茶堿對T淋巴細胞自噬、凋亡及脹亡調(diào)控作用的實驗性研究.pdf

1、氨茶堿用于治療支氣管哮喘已有50多年的歷史，其解除支氣管痙攣的作用已為臨床公認，對其作用機制的認識在不斷深入。傳統(tǒng)認為茶堿類藥物抑制磷酸二脂酶活性，使細胞內(nèi)cAMP增高從而引起支氣管擴張，而近年的研究表明氨茶堿還有廣泛的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用。目前已有很多實驗證實提高細胞內(nèi)cAMP水平的化合物可單獨或聯(lián)合作用誘發(fā)細胞凋亡。更有研究證實氨茶堿可以增加Jurkat和HL—60細胞的凋亡率及可促進哮喘氣道T淋巴細胞的凋亡。因此，推測氨茶堿可能通過

2、誘導免疫細胞程序性死亡來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。 過去，人們一直認為多細胞生物細胞死亡只有細胞壞死和細胞凋亡兩種，后者指細胞遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命，最后細胞裂解為若干凋亡小體而被其它細胞吞噬。實際上凋亡只是程序性細胞死亡的方式之一，又稱為Ⅰ型程序性細胞死亡，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)尚存在的其他細胞死亡方式，如自噬、脹亡等。自噬被稱為Ⅱ型程序性細胞死亡，是一種胞質(zhì)降解過程，負責清除包括細胞器在內(nèi)的胞質(zhì)組分，其標志性步驟是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來源的分離膜包

3、裹住待降解部分形成自噬小體。有研究認為，T淋巴細胞及其亞群通過自噬來達到免疫穩(wěn)態(tài)。而細胞脹亡是以細胞腫脹、核溶解為特征的被動性細胞死亡。一般認為，機體依靠凋亡方式來精確地控制組織內(nèi)細胞的數(shù)量，維持其正常結(jié)構和形態(tài)；通過脹亡來大規(guī)模清除一些過多的組織內(nèi)細胞。介導凋亡的死亡受體，如TNFR與其配體（TNF、FasL、抗Fas）結(jié)合后也介導脹亡的發(fā)生。這提示凋亡和脹亡可能還存在某些共同的信號途徑，它們的早期階段具有共同機制，脹亡可能是凋亡在某

4、種情況下不能完成其正常程序的結(jié)果。 研究目的：因而，本實驗擬通過檢測氨茶堿干預后小鼠脾T淋巴細胞凋亡、自噬及脹亡的情況，分析氨茶堿對T淋巴細胞死亡方式的影響，期待為氨茶堿作用機制提供新思路。 研究方法： 1．分離10只健康小鼠脾T淋巴細胞，分對照組及氨茶堿組（4個濃度梯度組，即1mg/L、5mg/L、25mg/L、125mg/L）置37℃，5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，收集72h細胞以流式細胞儀技術檢測其凋亡、自噬、

5、脹亡情況。 2．25只健康小鼠隨機分對照組及不同濃度氨茶堿組（分別為1 mg/kg、5 mg/kg、25mg/kg、125mg/kg），氨茶堿組小鼠分別予不同濃度氨茶堿灌胃、對照組予等量生理鹽水灌胃干預10天，分離小鼠脾T淋巴細胞，以流式細胞儀技術檢測其凋亡、自噬、脹亡情況。 結(jié)果： 1．不同濃度梯度氨茶堿體外培養(yǎng)對小鼠脾T淋巴細胞的影響 ①125mg/L、25mg/L、5mg/L濃度氨茶堿組與陰性對照組

6、比較，差異均有顯著性，自噬率均下降，P<0．05，提示氨茶堿可誘導小鼠脾T淋巴細胞自噬率下降。 ②125mg/L、25mg/L、5mg/L濃度氨茶堿組T淋巴細胞凋亡率與陰性對照組比較有所升高，差異有顯著性，P<0．05，提示氨茶堿可誘導T淋巴細胞凋亡。 ③各濃度氨茶堿組T淋巴細胞脹亡率與陰性對照組比較，差異均無顯著性，P>0．05，提示氨茶堿對小鼠脾T淋巴細胞脹亡無影響。 2．不同濃度梯度氨茶堿灌胃干預對小鼠脾T

7、淋巴細胞的影響 ①各濃度氨茶堿組與陰性對照組比較，差異均有顯著性，自噬率均下降，P<0．05，提示氨茶堿可誘導小鼠脾T淋巴細胞自噬率下降。 ②25mg/kg濃度氨茶堿組T淋巴細胞凋亡率與陰性對照組比較有所升高，差異有顯著性，P<0．05，其余濃度組比較則無顯著差異。 ③各濃度氨茶堿組T淋巴細胞脹亡率與陰性對照組比較，差異均無顯著性，P>0．05，提示氨茶堿對小鼠脾T淋巴細胞脹亡無影響。 結(jié)論： 1