表達(dá)IDO的Kupffer細(xì)胞在體內(nèi)外對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞的凋亡作用.pdf

1、目的：探討表達(dá)IDO的KC在體內(nèi)外對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的抑制和凋亡作用。 方法：聯(lián)合鏈酶蛋白酶和膠原酶在體灌注和離體消化的方法分離小鼠KC，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)經(jīng)IFN-γ處理或未處理的KC表達(dá)IDOmRNA和FasLmRNA的情況。高壓液相色譜儀分析IDO對(duì)色氨酸的分解作用以了解其活性。<'3>H嵌入增殖試驗(yàn)檢測(cè)KC對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的抑制情況。流式細(xì)胞儀分析KC對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡作用。構(gòu)建BAB

2、II／c→C57BL／6的皮膚移植模型，分為KC(未處理)、KC(IFN-γ處理)、KC(1—MT)及生理鹽水組，除了生理鹽水組外，于移植術(shù)前14、7、2天給受體輸入供體KC，同時(shí)1—MT組于移植術(shù)后0～7天經(jīng)腹腔注射1—MT(0。9mg／kg/d)，觀察各組別對(duì)皮膚移植物存活時(shí)間的影響。于移植術(shù)后第7天每組各取1只行小鼠皮瓣HE染色和TUNEL以檢測(cè)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和凋亡情況。Kaplan-Meier對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)對(duì)各組進(jìn)行生存分析。

3、 結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR提示KC并不組成性表達(dá)IDO,但是經(jīng)IFN-γ處理后，IDO和FasL在6h后表達(dá)量相對(duì)較高。IDO能降低培養(yǎng)基中色氨酸的濃度，升高其代謝產(chǎn)物犬尿氨酸濃度。表達(dá)IDO的KC能明顯抑制同種異體T淋巴細(xì)胞的增殖，但1-MT和抗FasL抗體能部分阻斷其增殖抑制作用，并且存在劑量依賴關(guān)系。表達(dá)IDO和FasL的KC能阻止同種異體T淋巴細(xì)胞于G1中期，誘導(dǎo)其凋亡。輸入表達(dá)IDO和FasL的KC能明顯延長(zhǎng)BABI／c→C5