內(nèi)源性大麻素對熱應激反應的調(diào)節(jié)效應.pdf

1、目的:內(nèi)源性大麻素通過激活G蛋白耦連的大麻素受體(CB1和CB2)而發(fā)揮對神經(jīng)、心血管、免疫等系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。此外,內(nèi)源性大麻素也具有抗炎、鎮(zhèn)痛等多種醫(yī)療用途,但其生理效應尚未完全揭示。熱應激反應是細胞最重要的應激保護機制之一,主要通過激活熱休克轉(zhuǎn)錄因子1而顯著增強包括分子伴侶機制在內(nèi)的多種保護機制。而內(nèi)源性大麻素對熱應激反應有無調(diào)節(jié)效應及其機制如何,迄今國內(nèi)外尚無研究報道。本研究在文獻調(diào)研的基礎上,初步推測大麻素可能通過其受體對熱應激

2、反應產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。迄今國內(nèi)外尚無研究報道。本研究在文獻調(diào)研的基礎上,初步推測大麻素可能通過其受體對熱應激反應產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。為證實這一假設,本研究擬以大鼠膠質(zhì)瘤細胞株作為研究對象,觀察內(nèi)源性大麻素是否對其熱應激反應具有調(diào)節(jié)效應,并探索其相應的受體機制;以期初步闡明內(nèi)源性大麻對熱應激反應的調(diào)節(jié)效應及機制,為內(nèi)源性大麻素的效應及機制研究提供新思路和突破點。
　　 方法:選用大鼠膠質(zhì)瘤C6細胞為實驗模型;實驗組共分4類,即熱應激組(42

3、℃水浴1h)、熱應激+內(nèi)源性大麻素(2-AG)處理組、熱應激+2-AG+CB1受體特異性拮抗劑(AM251)或CB2受體特異性拮抗劑(AM630)處理組、以及各自的對照組;設3h、6h、12h、24h等4個時相點。①采用RT-PCR技術,檢測熱應激、熱應激+2-AG、熱應激+2-AG+大麻素受體抑制劑處理后HSP70 mRNA表達水平。②采用Western Blot技術,檢測熱應激、熱應激+2-AG、熱應激+2-AG+抑制劑處理后HSP

4、70蛋白表達水平。
　　 結果:①C6細胞熱應激處理后,分別于3h、6h、12h、24h檢測HSP70 mRNA及蛋白的變化。結果顯示,熱刺激后3h、6h、12h、24h,HSP70 mRNA和蛋白表達水平均較對照組顯著增高,12h時增加最為顯著。②選擇熱應激后12h為觀察時相點,以10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L三種不同濃度的2-AG進行處理,結果發(fā)現(xiàn)10-5mol/L2-AG對熱刺激1h后HSP70

5、 mRNA、蛋白表達具有顯著促進作用;而10-7mol/L、10-6mol/L2-AG則無此促進效應。③觀察熱刺激及10-5mol/L2-AG處理后,不同時相點HSP70 mRNA和蛋白的表達情況,結果發(fā)現(xiàn)2-AG處理后HSP70 mRNA和蛋白表達在6h到達高峰,無2-AG處理對照組HSP70 mRNA和蛋白在12h到達高峰。④以CB1受體特異性拮抗劑(AM251)和CB2受體特異性拮抗劑(AM630)處理細胞后,檢測2-AG對HSP

6、70 tuRNA、蛋白表達的影響,結果顯示,AM251阻斷了2-AG對HSP70 mRNA和蛋白的促進效應,而AM630無此效應。
　　 結論:一定濃度的內(nèi)源性大麻素2-AG對熱刺激處理的C6細胞內(nèi)HSP70基因的表達有明顯促進效應,表明2-AG可以參與調(diào)控細胞熱應激反應;此促進效應可被CB1特異性受體抑制劑AM251所抑制,表明2-AG的抑制效應是由CB1,而非CB2,信號通路所介導。本研究結果揭示了2-AG可能具備調(diào)控熱應激