內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在抑郁癥發(fā)生機制中的作用.pdf

1、研究背景：內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)包括大麻素受體(CBreceptor)、內(nèi)源性大麻素(eCB)和與eCB合成、降解相關的酶類。目前已被證實的內(nèi)源性大麻素主要有兩種：N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)，它們均具有與天然大麻素四氫大麻酚(THC)極為相似的三維結(jié)構(gòu)。外源性和內(nèi)源性大麻素都是通過與大麻素受體結(jié)合發(fā)揮其生物學作用。目前證實體內(nèi)存在兩種大麻素受體：CB1受體和CB2受體。大麻素受體是G蛋白耦聯(lián)受體，基因克隆

2、研究發(fā)現(xiàn)這兩種受體有44％的氨基酸序列同源。CB2受體主要分布于外周免疫細胞，如脾臟邊緣區(qū)、免疫細胞、扁桃體等，CB2功能主要與免疫調(diào)節(jié)有關。CB1受體主要分布于腦、脊髓和外周神經(jīng)系統(tǒng)中，腦內(nèi)CB1受體主要分布于基底神經(jīng)節(jié)(黑質(zhì)、蒼白球、外側(cè)紋狀體)、海馬CA1區(qū)錐體細胞層，小腦和大腦皮層。CB1受體的這種分布可能與大麻素對記憶、認知、運動控制的調(diào)節(jié)功能有關；此外，在延髓、中腦導水管周圍、脊髓后角等疼痛傳導徑路也有大量CB1受體分布。外

3、周神經(jīng)系統(tǒng)比中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達的CB1受體量少，它們分散地表達于諸如神經(jīng)末梢等處，介導神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。最近大量的研究數(shù)據(jù)提示，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導功能的失調(diào)有可能是抑郁癥產(chǎn)生的原因。
　　 伏隔核也稱伏核，是基底前腦的一個較大的核團，位于基底核與邊緣系統(tǒng)交界處，隔區(qū)的外下方，尾殼核的內(nèi)下方，前方與嗅前核相連，后連接紋狀核。伏隔核于周邊核團投射關系比較復雜，其纖維聯(lián)系與邊緣系統(tǒng)較為密切，主要接受前腦的傳入纖維，包括內(nèi)

4、側(cè)前額皮質(zhì)、杏仁核、海馬和下丘腦；也接受腦橋區(qū)的投射纖維，包括腹側(cè)被蓋區(qū)、背側(cè)中縫、腦橋網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)腹側(cè)為腹側(cè)蒼白球和嗅結(jié)節(jié)，是獎賞環(huán)路中一個重要的組成部分。最近研究發(fā)現(xiàn)，伏核功能的異?？赡芘c興趣缺失以及抑郁癥其他癥狀的產(chǎn)生相關。
　　 研究目的：應用慢性非預期性應激(CUS)的小鼠抑郁模型進行研究，探討伏核區(qū)域內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號傳遞的改變是否是引起抑郁行為學改變的基礎。
　　 研究方法：
　　 (1)經(jīng)過6-8周

5、的慢性非預期性應激(CUS)建立小鼠抑郁模型，同時觀察1周的次慢性非預期性應激(sub-CUS)對實驗動物的影響。
　　 (2)抑郁模型完成后，進行與抑郁癥相關的動物行為學實驗檢測，包括蔗糖水攝入實驗、曠場實驗、新環(huán)境抑制攝食實驗和強迫游泳實驗。
　　 (3)行為學實驗完成后，處死動物分離胸腺和腎上腺并稱重，評估慢性非預期性應激對免疫系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸功能的影響；取血，應用酶聯(lián)免疫吸附方法進行血清皮質(zhì)

6、酮含量測定；取腦并分離紋狀體，應用高效液相色譜(HPLC)法對腦組織內(nèi)AEA和2-AG含量進行測定。
　　 (4)動物處死后制備腦片(brain slice)，使用電生理設備記錄CB1受體介導的神經(jīng)突觸可塑性變化的電生理指標，包括細胞內(nèi)記錄(DSE)，細胞外記錄長時程抑制(LTD)和Ⅰ型代謝型谷氨酸受體(groupⅠ mGluR)激動劑DHPG對場-興奮性突觸后電位(fEPSP)的抑制。
　　 (5)在腦片上應用CB1受

7、體激動劑WIN55，212-2，細胞外記錄CB1受體激動劑對場-興奮性突觸后電位(fEPSP)的抑制作用，比較應激組與非應激組之間CB1受體功能是否發(fā)生改變。
　　 結(jié)果：
　　 (1)給予慢性非預期性應激6周后，小鼠表現(xiàn)出抑郁樣行為學改變，包括攝入蔗糖水絕對量和相對量減少，曠場實驗自主活動性降低和中央停留時間縮短，新環(huán)境攝食潛伏期延長，強迫游泳實驗不動時間延長。而次慢性非預期性應激(給予應激1周)后的動物沒有出現(xiàn)明顯的

8、行為學改變。
　　 (2)在腦片的伏核核心區(qū)(Nac core)記錄興奮性突觸后電流(EPSCs)，在單一使用去極化刺激條件下，無論是通過提高去極化程度(從-80mV到10或20mV)還是延長去極化時間(1s，5s和10s)都無法成功誘導DSE。在細胞外液中加入Ⅰ型mGluR的激動劑DHPG(5μM)后，從-80mV去極化到0mV持續(xù)5s可以成功誘導DSE。
　　 (3)使用以上方法在伏核核心區(qū)域誘導DSE，慢性非預期性

9、應激與對照組相比誘導出DSE的幅度降低，差異有統(tǒng)計學意義，而DSE的持續(xù)時間無統(tǒng)計學差異。而次慢性非預期性應激組誘導DSE無論在幅度還是持續(xù)時間上與對照組相比都無統(tǒng)計學差異。
　　 (4)在伏核核心區(qū)域誘導內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)介導的LTD，次慢性非預期性應激組與對照組相比LTD幅度無統(tǒng)計學差異，而慢性非預期性應激影響LTD的形成。
　　 (5)應用抗抑郁藥氟西汀(Fluoxetine)治療對于慢性非預期性應激造成的行為學異常

10、和內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號的傳遞受損都有改善作用。
　　 結(jié)論：研究結(jié)果表明，慢性非預期性應激可以導致實驗動物抑郁樣行為改變和伏核區(qū)域eCB/CB1受體介導的信號轉(zhuǎn)導受損，次慢性應激則沒有以上作用；應用抗抑郁藥物氟西汀可以逆轉(zhuǎn)慢性應激造成的改變。以上結(jié)果提示慢性非預期型應激抑郁模型動物伏核區(qū)域的內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導功能受損。
　　 意義：研究慢性應激導致的內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)功能異常可以加深我們對抑郁癥發(fā)病機制的認識，促進抗