脂多糖誘發(fā)肝損傷機(jī)理的初步研究.pdf

1、該研究運(yùn)用常規(guī)的分子生物學(xué)和免疫組化方法,動(dòng)態(tài)分析LPS刺激后不同時(shí)間段肝臟LPS-TLR<,4>途徑信號(hào)分子以及功能分子TNF-α的表達(dá)與肝臟病理、生化變化的關(guān)系,并比較LPS刺激后凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化,初步探討LPS所致肝損傷的機(jī)理.Balb/c小鼠腹腔注射LPS建立內(nèi)毒素血癥模型,分別在0、3、6、12、24、30小時(shí)處死小鼠取肝臟,HE染色觀察病理改變,逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法檢測肝組織TLR<,4>(Toll-like

2、 receptor 4)、MyD88在mRNA水平的表達(dá).末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶原位標(biāo)記法檢測肝細(xì)胞凋亡,免疫組化法檢測TNF-α及凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2、Fas、Fasl表達(dá)變化.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LPS注入腹腔后0-12小時(shí)小鼠一般情況無明顯改變,肝臟病理改變不明顯,24小時(shí)小鼠肝臟開始出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤、壞死;3-6小時(shí)血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肝細(xì)胞凋亡和TNF-α表達(dá)已經(jīng)達(dá)到高峰,12小時(shí)后明顯減少,24小時(shí)后凋亡、壞死并存,以壞死為

3、主;同時(shí)肝臟TLR4 mRNA在LPS注射3小時(shí)后顯著下調(diào),6-12小時(shí)明顯受抑制,24小時(shí)后則基本恢復(fù);肝臟MyDg8 mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)變化不明顯;LPS刺激后3-6小時(shí)肝臟bax、Fas表達(dá)達(dá)高峰,而bcl-2、Fasl表達(dá)在6-12小時(shí)達(dá)到高峰,隨后都逐漸下降.該研究結(jié)果提示,LPS所致肝損傷呈時(shí)間依從性:早期出現(xiàn)以TNF-α為中心的肝細(xì)胞凋亡,此時(shí)肝臟TLR4 mRNA的表達(dá)明顯抑制;中后期,肝組織出現(xiàn)明顯病理變化,凋亡、壞