脂多糖激活補體對內(nèi)皮細胞的作用及抑制補體對脂多糖致急性肺損傷的影響.pdf

1、目的:在細胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活血清補體對內(nèi)皮細胞的作用和影響。評價特定抗補體活性物質(zhì)對LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞以及LPS致急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)的保護作用。
　　 方法:研究LPS激活血清補體的作用方式和特點,觀察LPS激活補體對內(nèi)皮細胞表達粘附分子和凋亡的影響。采用ELISA法檢測內(nèi)皮細胞釋放P-selectin、E-selectin和ICAM-

2、1的變化,化學發(fā)光法檢測Caspase-3/7的活化情況,SRB法檢測LPS激活補體對內(nèi)皮細胞生長的影響。在前期工作中發(fā)現(xiàn),香椿果活性多酚是一個高活性的抗補體物質(zhì),能強烈地抑制補體激活。本實驗通過測定內(nèi)皮細胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1和Caspase-3/7的變化情況,評價香椿果抗補體活性多酚對LPS激活血清補體損傷內(nèi)皮細胞的作用。動物實驗采用LPS致ALI模型,其中控制補體的實驗組分別提前2h給予蛇毒新型

3、抗補體蛋白AtraseA和提前24h給予眼鏡蛇毒因子(cobravenomfactor,CVF)。在給予LPS后1h、6h、12h采集標本,測定各組血清補體活性和肺含水量,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)測定細胞數(shù)、蛋白含量、TNF-α、P-selectin含量,比色法測定肺組織勻漿中髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量,取肺組織行病理切片檢查,評價兩種抗補體蛋白

4、對大鼠ALI的保護作用。
　　 結果:LPS能夠激活血清補體,這種激活呈現(xiàn)量效、時效性。LPS激活血清補體可誘導內(nèi)皮細胞瞬時顯著釋放P-selectin,E-selectin和ICAM-1表達也明顯上調(diào),同時可導致Caspase-3/7的活化。在本實驗條件下,LPS激活血清補體對內(nèi)皮細胞生長未產(chǎn)生抑制。香椿果抗補體活性多酚不能下調(diào)LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞表達粘附分子和誘導凋亡。在動物實驗中,模型組給予LPS后出現(xiàn)了典型的ALI

5、癥狀,大鼠血清補體活性明顯下降?？寡a體蛋白實驗組均能明顯降低大鼠血清補體水平、肺組織MPO含量和BALF中細胞數(shù)、TNF-α和P-selectin含量,減輕肺組織炎癥反應;但對肺含水量和BALF中蛋白含量的影響無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:LPS激活血清補體可損傷內(nèi)皮細胞,導致內(nèi)皮細胞顯著表達粘附分子以及發(fā)生凋亡。香椿果抗補體活性多酚雖能強烈抑制補體經(jīng)典途徑和替代途徑激活,但對LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞沒有保護作用。采用兩種不同類