三苯氧胺逆轉(zhuǎn)過表達BCRP的JAR-VP16細胞對VP16耐藥性的研究.pdf

1、目的：人乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)在多種正常組織和腫瘤細胞中表達，過表達BCRP的腫瘤細胞可對多種化療藥物交叉耐藥。經(jīng)足葉乙甙(Vp16)誘導的人絨癌細胞株JAR/Vp16高表達BCRP且發(fā)現(xiàn)有多藥耐藥(MDR)性。三苯氧胺(TAM)系抗雌激素藥物，臨床上主要用于雌激素受體(ER)陽性和/或孕激素受體(PR)陽性乳腺癌患者的內(nèi)分泌治療。本研究將TAM作用于人絨癌細胞株JAR、JAR/Vp16以及人乳腺癌細胞株MCF-7，研究TAM在JA

2、R、MCF-7細胞中的化療增敏作用及JAR/Vp16細胞中的逆轉(zhuǎn)耐藥作用，并初步探討其作用機制。 方法：以MTT法檢測單藥TAM、Vp16及TAM聯(lián)合Vp16對JAR、JAR/Vp16的藥物毒性及單藥TAM、表阿霉素(EPI)和TAM聯(lián)合EPI對MCF-7的藥物毒性。并進一步用平板克隆形成試驗比較Vp16單藥、TAM單藥及TAM與Vp16聯(lián)合時對JAR/Vp16細胞集落形成的影響。運用流式細胞技術(shù)以hochest 33342和P

3、I雙染觀察TAM對JAR、JAR/Vp16細胞胞內(nèi)熒光值強度的影響。運用RT-PCR和Westem blot方法觀察JAR、JAR/Vp16細胞中Vp16單藥、TAM單藥及兩藥聯(lián)用時的BCRP的mRNA水平和蛋白水平的表達。 結(jié)果：JAR與JAR/Vp16對Vp16的敏感性不同(P<0.01)，后者對Vp16的IC<,50>是前者的71.24倍。兩株細胞中均未檢測到BCRP 482位點的突變， JAR/Vp16較JAR細胞的BC

4、RP表達水平明顯上調(diào)(P<0.001)。TAM可使得JAR對Vp16的敏感性增加，并可逆轉(zhuǎn)JAR/Vp16對Vp16的耐藥，顯著增加Vp16對JAR、JAR/Vp16細胞的細胞毒作用(P<0.05)。與未加入TAM時相比，TAM處理的JAR及JAR/Vp16胞內(nèi)的hochest 33342蓄積增加，外排減少(P<0.01)。在mRNA水平和蛋白水平，TAM均可下調(diào)BCRP的表達(P<0.05)，并拮抗Vp16對BCRP的上調(diào)作用(P<0

5、.05)。此外尚觀察到TAM使表達BCRP的MCF-7細胞對表阿霉素的敏感性增加(P<0.001)。 結(jié)論：1.BCRP的過表達可能是JAR/Vp16細胞株對Vp16產(chǎn)生耐藥的原因之一。2.TAM可以增加Vp16的細胞毒作用，增加JAR細胞對Vp16的敏感性，并可逆轉(zhuǎn)JAR/Vp16細胞對Vp16的耐藥性。這種作用有可能與TAM可抑制BCRP的泵功能有關(guān)，從而使得Vp16的泵出減少、胞內(nèi)的蓄積增加。3.TAM可下調(diào)BCRP的表達