制備附載rhTGF-β1的PLGA緩釋支架及其對(duì)MSCs細(xì)胞形態(tài)的影響.pdf

1、目的：探討自制的附載轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(rhTGF-β1)的D，L-乳酸-CO-乙醇酸(PLGA)體外緩釋生物支架對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSOs)細(xì)胞形態(tài)的影響，觀察作為載體材料的新型復(fù)合PLGA支架對(duì)細(xì)胞因子(rhTGF-β1)釋放的調(diào)控作用，從而為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用提供依據(jù)。 方法： 1.采用本校董寅生教授制作的粒子瀝濾-冷凍干燥復(fù)合工藝，制備附載轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的PLGA多孔支架和不含轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的PLGA多孔

2、支架，將所有支架切成φ10×1×1mm的薄片。 2.將制備好的附載rhTGF-β1的PLGA生物支架進(jìn)行體外釋藥試驗(yàn)，采用ELISA法檢測(cè)在PLGA的降解過程中rhTGF-β1的釋藥規(guī)律，并繪出rhTGF-β1在支架降解過程中的釋放曲線。 3.分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)三代后后分別接種于附載和未附載rhTGF-β1的PLGA支架上。以附載rhTGF-β1的PLGA支架為實(shí)驗(yàn)組和未附載rhTGF-β1的PLGA支

3、架為對(duì)照組，掃描電鏡觀察不同時(shí)間段MSC在兩組支架上的生長(zhǎng)情況。MTT法測(cè)驗(yàn)兩組支架上細(xì)胞活力情況。 結(jié)果： 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明rhTGF-β1能被包裹進(jìn)PLGA支架中而且可以在PLGA支架降解過程中可以持續(xù)釋放出來，并能保持rhTGF-β1的生物活性。P釋放初期rhTGF-β1在最初的兩日內(nèi)釋放量為13.4％，表現(xiàn)為釋放曲線的急劇上抬，此為rhTGF-β1的爆發(fā)性釋放。而兩日后釋放曲線緩慢上抬，14天時(shí)達(dá)38.6％表現(xiàn)為

4、rhTGF-β1的持續(xù)緩慢釋放。 2、掃描電鏡觀察培養(yǎng)7天時(shí)對(duì)照組支架空隙間有細(xì)胞相連，但細(xì)胞數(shù)量較少。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞呈球形黏附在支架表面及空隙內(nèi)，并可見細(xì)胞分泌的基質(zhì)將細(xì)胞包埋，空隙間細(xì)胞連接成片。MTT法也證明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)量明顯多于對(duì)照組。 結(jié)論：采用冰粒子作為致孔劑法制成的附載TGF-β1的PLGA緩釋支架具有良好的載藥、釋藥性能。細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組材料上培養(yǎng)7d后，電鏡觀察下細(xì)胞在支架上成長(zhǎng)較對(duì)照組良好，細(xì)胞間微絨毛豐富，