中藥肝復(fù)康對實驗性肝纖維化大鼠細胞外基質(zhì)及其相關(guān)因子的影響.pdf

1、目的：觀察肝復(fù)康作用實驗性肝纖維化大鼠后血清細胞外基質(zhì)標志物（Ⅳ型膠原、Ⅲ型前膠原、透明質(zhì)酸、層粘連蛋白）的變化情況及與細胞外基質(zhì)降解與沉積有關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）基因表達變化。以期深入探討肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展及逆轉(zhuǎn)過程機制，最終為臨床診斷及改善肝纖維化的治療現(xiàn)狀提供新思路。 方法：健康SD大鼠77只，將其隨機分為正常對照組（C）10只，模型組（M）11只，模型對照組（M

2、C）11只，低劑量治療組（LT）10只、中劑量治療組（MT）12只、高劑量治療組（HT）12只，預(yù)防組（P）11只。除正常對照組外，余鼠造模。皮下注射以橄欖油稀釋的10%的四氯化碳，5ml/kg，每周兩次，共12周，正常對照組以同樣方法皮下注射生理鹽水。其中預(yù)防組于造模同時以312.5mg/kg.d劑量的肝復(fù)康煎劑（主要成分為丹參、黃芪、赤芍、白芍、柴胡等）灌胃12周。高劑量治療組、中劑量治療組、低劑量治療組則于造模第9周后開始分別以3

3、125mg/kg.d、312.5mg/kg.d、31.25mg/kg.d劑量的肝復(fù)康灌胃12周。以上各劑量藥物均溶于10ml/kg的生理鹽水中。正常對照組及模型對照組則以等容量的生理鹽水灌胃。第12周末將模型組、預(yù)防組大鼠隔夜禁食，次日稱量體重后，以乙醚麻醉腹主動脈采血檢測各項指標，處死大鼠，迅速取出肝組織，從肝右葉的中部切取肝組織于-70℃冰箱保存用于RT-PCR。第20周末將其余各組大鼠以同樣方法處死，取出肝組織，備用。應(yīng)用放射免疫

4、分析法檢測大鼠血清樣本中各項指標的變化情況（Ⅳ型膠原、Ⅲ型前膠原、透明質(zhì)酸、層粘連蛋白）；采用RT-PCR法檢測各組大鼠肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）基因的表達情況，用Olympus顯微攝像系統(tǒng)采集圖片，用圖像分析軟件測定其積分光密度（IOD），以IOD值表示表達水平，對IOD值進行分析和比較。 結(jié)果：1、模型組及模型對照組血清Ⅳ型膠原、Ⅲ型前膠原、透明質(zhì)酸、層粘連蛋白含量較

5、之正常對照組均有明顯增高（P=0.000），預(yù)防組與正常對照組血清四項指標比較無顯著差異（P>0.05）。經(jīng)不同劑量的中藥肝復(fù)康干預(yù)后，該四項指標血清值均有明顯降低（P<0.05），并以中劑量組作用效果最明顯；2、基于RT-PCR和其IOD值檢測得到的結(jié)果提示：MMP-2和TIMP-2在正常對照組表達微弱，在肝臟纖維化模型及模型對照組表達較正常對照組顯著增強（P<0.05），經(jīng)不同劑量的中藥肝復(fù)康治療后表達均有明顯降低（P<0.05），

6、其中中劑量治療組降低水平最為顯著，其表達水平基本恢復(fù)至正常大鼠相應(yīng)表達水平，治療效果優(yōu)于高劑量、低劑量。 結(jié)論：①中藥肝復(fù)康具有較好的預(yù)防和治療肝纖維化作用，并且以中劑量作用效果最為明顯，是較為合理的用藥劑量。②中藥肝復(fù)康可以通過抑制膠原合成，減少ECM生成減輕大鼠肝纖維化程度。③中藥肝復(fù)康可能通過解除MMP-2的抑制因素而提高其活性，以促進膠原降解。④中藥肝復(fù)康通過調(diào)控基因表達水平，抑制MMP-2和TIMP-2mRNA表達，使