大蒜素對肝纖維化大鼠細胞外基質及相關炎癥因子的影響研究及機理探討.pdf

1、目的：
　　初步評價大蒜素對豬血清誘導的大鼠免疫性肝纖維化的防治效果，為大蒜素治療肝纖維化提供藥理學依據(jù)，具體內容如下：1.大蒜素對豬血清誘導的大鼠免疫性肝纖維化的預防作用；2.大蒜素對豬血清誘導的大鼠免疫性肝纖維化的治療作用；3.大蒜素對細胞外基質主要成分的影響；4.大蒜素對炎癥細胞因子及肝臟免疫功能的調節(jié)作用。
　　方法：
　　采用豬血清腹腔注射法建立大鼠肝纖維化模型，實驗時間共12周。將50只SD大鼠隨機分為5組

2、：正常對照組、模型組、小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組。除正常對照組，余組采用豬血清腹腔注射法建立肝纖維化模型，5ml/只，每周2次，共12周。小、中劑量預防組于實驗開始，分別予以大蒜素11、22 mg/(kg·d)灌胃，共12周。中劑量治療組于實驗第9周起予以大蒜素22 mg/(kg·d)灌胃，共4周。
　　實驗結束，將大鼠麻醉后心臟采血制備血清，留取肝臟組織樣本。檢測以下內容：（1）采用HE染色及天狼星紅染色進行肝臟病

3、理組織學觀察；（2）肝功能：采用全自動生化儀檢測大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TB）、間接膽紅素（IB）、直接膽紅素（DB）；（3）血清中細胞外基質主要成分：采用ELISA法檢測血清中Ⅰ型膠原（CⅠ）、Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）；（4）肝組織中細胞外基質主要成分的表達：采用免疫蛋白印記法（Western blot）法檢測肝組織中Ⅰ型膠

4、原蛋白、Ⅳ型膠原蛋白的表達水平；（5）a-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）：采用ELISA法檢測血清中α-SMA；（6）炎癥因子：采用ELISA法檢測血清中生長轉化因子-β1（TGF-β1）、白介素-10（IL-10）、干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；
　　結果：
　?。?）肝臟病理組織學觀察：肝臟病理組織學檢查結果顯示大蒜素預防及治療組肝細胞變性和纖維化程度明顯減輕，肝組織結構比較完好。與模型組比較，

5、大蒜素小劑量預防組、大蒜素中劑量預防組、大蒜素中劑量治療組纖維增生程度較輕。
　　（2）肝功能水平變化：各組大鼠血清ALT、AST、TP、ALB、TB、DB、IB水平均位于正常范圍，各組大鼠肝功能指標比較后未見明顯差異，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　?。?）血清中細胞外基質的主要成分變化：與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組CⅠ、PⅢNP水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與模型組比較

6、，中劑量預防組、中劑量治療組C IV水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）肝組織中細胞外基質主要成分的變化：與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組CⅠ蛋白、C IV蛋白表達水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?。?）α-SMA水平變化：與模型組比較，中劑量預防組、中劑量治療組α-SMA水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）血清中炎癥因子水

7、平變化：與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組IL-6、TNF-α水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組TGF-β1水平較明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組IFN-γ明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預防組、中劑量預防組、中劑量治療組IL-10水平無明顯改善，差異無統(tǒng)計學意