急性白血病死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)基因表達(dá)及啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：—臨日期：趔礦中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究

2、生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名

3、：指導(dǎo)教師簽名：日中文論著摘要急性白血病死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)基因表達(dá)及啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)研究目的通過(guò)對(duì)急性白血病病人及體外腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行的DNA甲基化及基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究，力求探討DAPK基因甲基化在急性白血病中的表達(dá)情況及其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化的狀態(tài)，并分析兩者之間的相關(guān)程度，為DAPK基因在急性白血病中的生物學(xué)功能的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)，為急性白血病的臨床診療新思路提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法1、標(biāo)本的選取標(biāo)本選取急性白血病初發(fā)或治療后

4、復(fù)發(fā)確診患者119例，其中男性51例，女性68例，中位年齡41(1976)歲。急性髓系白血病102例，急性淋巴細(xì)胞白血病17例。所有患者均參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》第三版進(jìn)行診斷，按照法英美協(xié)作組診斷標(biāo)準(zhǔn)(FAB標(biāo)準(zhǔn))進(jìn)行分組。選取血象正常非白血病患者為正常對(duì)照。2、細(xì)胞的提取肝素抗凝骨髓經(jīng)淋巴細(xì)胞Ficoll—ttypaque液分離單個(gè)核細(xì)胞，用于下一步實(shí)驗(yàn)。3、RNA提取及RTPCR檢測(cè)DAPKmRNA表達(dá)用Trizol提取細(xì)胞總

5、RNA，取約510106細(xì)胞加入到滅菌的15ml塑料離心管中，加入lmlTrizol液，充分混勻，室溫放置5分鐘。加入氯仿02ml，震蕩混勻15秒，室溫放置3分鐘，4。C11000rpm離心15分鐘。緩慢吸取上層水相，加入到新15ml塑料離心管中，再向該新管中加入05ml異丙醇，混勻，室溫放置lO分鐘。4。C11000rpm離心10分鐘，棄去上清，加入75％L醇05ml，充分洗滌管蓋、管壁及管底沉淀。4。C7500rpm離心10分鐘，緩