胸腺上皮腫瘤中MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化及蛋白表達(dá)研究.pdf

1、目的：胸腺上皮腫瘤多發(fā)生于前縱隔，具有潛在的侵襲性，其組織學(xué)以及生物學(xué)特性較繁雜，現(xiàn)手術(shù)完整切除是較好治療方式，但少數(shù)病人術(shù)后仍復(fù)發(fā)，為尋求一些參數(shù)作為評(píng)估胸腺上皮腫瘤預(yù)后的參考，本課題選取甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)和免疫組織化學(xué)兩種試驗(yàn)方式，對(duì)胸腺上皮腫瘤中的 O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT）進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)出其中甲基化和蛋白表達(dá)的情況，并評(píng)估兩種

2、試驗(yàn)方式結(jié)果與胸腺上皮腫瘤的相關(guān)性，為臨床診治提供依據(jù)。
　　方法：
　　1采用甲基特異性聚合酶擴(kuò)增鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ methylation specific polymerase chain reaction, MSP）法檢測(cè)94例胸腺上皮腫瘤中MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。
　　2免疫組織化學(xué)染色（immunohistochemistry, IHC）SP法檢測(cè)胸腺上皮腫瘤組織中MGMT蛋白表達(dá)情況。
　　3病例隨

3、訪及查閱病歷了解患者信息及預(yù)后狀況。
　　4應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1 MGMT甲基化與蛋白表達(dá)缺失
　　35例胸腺上皮腫瘤標(biāo)本檢測(cè)為MGMT表達(dá)降低，其中25例可測(cè)到MGMT甲基化（71.4％），59例腫瘤標(biāo)本檢測(cè)為MGMT正常表達(dá)，其中17例可測(cè)到MGMT甲基化（28.8%）。這說明MGMT甲基化與蛋白缺失之間相關(guān)（P<0.05）。
　　2 WHO分型、MGMT

4、甲基化和蛋白表達(dá)缺失
　　胸腺上皮腫瘤組織中，胸腺癌 MGMT啟動(dòng)子區(qū)甲基化率為71.4%（20/28）明顯高于胸腺瘤33.3%（22/66），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；MGMT蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中，胸腺癌中蛋白表達(dá)降低發(fā)生率為78.6%（22/28）明顯高于胸腺瘤19.7%（13/66），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MGMT甲基化與胸腺瘤中組織學(xué)亞型無明顯相關(guān)：A型6例，1例發(fā)生甲基化（16.7%），AB

5、型16例，6例發(fā)生甲基化（37.5%），18例B1型，4例發(fā)生甲基化（22.2%），B2型16例，7例發(fā)生甲基化（43.8%），B3型10例，4例發(fā)生甲基化（40.0%）。
　　MGMT蛋白缺失和胸腺瘤組織學(xué)亞型之間無明顯相關(guān)。A型6例，0例發(fā)生蛋白表達(dá)缺失（0%），AB型16例，3例發(fā)生蛋白表達(dá)缺失（18.8%），18例B1型，3例發(fā)生蛋白表達(dá)缺失（16.7%），B2型16例，3例發(fā)生蛋白表達(dá)缺失（18.8%），B3型10例，3

6、例發(fā)生蛋白表達(dá)缺失（30.0%）。
　　3 Masaoka分期、MGMT甲基化和蛋白表達(dá)缺失
　　胸腺上皮腫瘤中發(fā)生甲基化，分別為：Ⅰ期13.3%（4/30），Ⅱ期36.8%（7/19），Ⅲ期50%（10/20），Ⅳ期84.0%（21/25）。中晚期腫瘤（Ⅲ+Ⅳ期）MGMT甲基化發(fā)生率高于早期腫瘤（Ⅰ+Ⅱ期），其中中晚期腫瘤45例，31例發(fā)生甲基化（68.9%），早期腫瘤49例，11例發(fā)生甲基化（22.4%），兩組數(shù)據(jù)差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。胸腺瘤中甲基化發(fā)生率，分別為：Ⅰ期10.7%（3/28），Ⅱ期45.5%（5/11），Ⅲ期35.7%（5/14），Ⅳ期69.2%（9/13）。中晚期腫瘤（Ⅲ+Ⅳ期）甲基化發(fā)生率與早期腫瘤（Ⅰ+Ⅱ期）甲基化發(fā)生率有差異（14/27,51.9%vs8/39,20.5%, P<0.05）。
　　胸腺上皮腫瘤中發(fā)生蛋白表達(dá)缺失，分別為：Ⅰ期13.3%（4/30），Ⅱ期42.1%（8/19），Ⅲ期40.0%（8/2

8、0），Ⅳ期60.0%（15/25）。中晚期腫瘤（Ⅲ+Ⅳ期）MGMT蛋白表達(dá)缺失發(fā)生率明顯高于早期腫瘤（Ⅰ+Ⅱ期），其中中晚期腫瘤45例，23例發(fā)生蛋白缺失（51.1%），早期腫瘤49例，12例發(fā)生蛋白缺失（24.4%）（P<0.05）。胸腺瘤中蛋白表達(dá)缺失發(fā)生率，分別為：Ⅰ期7.1%（2/28），Ⅱ期27.3%（3/11），Ⅲ期35.7%（5/14），Ⅳ期23.0%（3/13）。中晚期腫瘤中（Ⅲ+Ⅳ期）MGMT蛋白表達(dá)缺失發(fā)生率與早期腫

9、瘤（Ⅰ+Ⅱ期）無明顯差異（8/27,29.6%vs5/39,12.8%, P>0.05）。
　　4伴發(fā)重癥肌無力（MG）
　　伴發(fā)MG患者中MGMT啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率為60%（12/20），未伴發(fā)MG患者中甲基化發(fā)生率為40.5%（30/74），伴發(fā)MG與MGMT啟動(dòng)子區(qū)甲基化統(tǒng)計(jì)學(xué)無明顯差異（12/20,60%vs30/74,40.5%, P>0.05）。伴發(fā) MG患者中 MGMT蛋白表達(dá)缺失發(fā)生率55.0%（11/20

10、），未伴發(fā)MG患者中蛋白表達(dá)缺失發(fā)生率32.4%（24/74），伴發(fā)MG與MGMT蛋白表達(dá)無明顯關(guān)聯(lián)（11/20,55.0%vs24/74,32.4%, P>0.05），
　　伴發(fā)MG與WHO組織學(xué)分型無明顯關(guān)聯(lián)（P>0.05），20例伴發(fā)MG病例中，A型0例（0.0%），AB型0例（0.0%），B1型3例（15.0%）， B2型5例（25.0%），B3型3例（15.0%），胸腺癌9例（45.0%）。伴發(fā)MG與Masaoka臨床分

11、期無明顯關(guān)聯(lián)（P>0.05），早期腫瘤（Ⅰ+Ⅱ期）7例（35.0%），中晚期腫瘤13例（65.0%）。
　　5總體生存率
　　檢測(cè)出MGMT甲基化的病例與未檢測(cè)出甲基化的病例各自的總生存率之間無明顯差異（67.6% VS79.9%，5年生存率；P>0.05）。表現(xiàn)出MGMT表達(dá)缺失的病例與表現(xiàn)出 MGMT表達(dá)正常的病例各自的總生存率之間無明顯差異（70.3%VS78.1%，5年生存率；P>0.05）。WHO組織學(xué)分型下，胸腺

12、瘤的病例總生存率明顯高于胸腺癌（84.6%vs54.7%，五年生存率；P<0.05），Masaoka分型下，Ⅰ/Ⅱ期患者術(shù)后生存率高于Ⅲ/Ⅳ患者（85.0%vs64.3%，五年生存率；P<0.05）。
　　6多因素分析甲基化、分期以及組織學(xué)分型
　　我們的參數(shù)包括年齡，性別，組織分型，臨床分期以及重癥肌無力。只有胸腺癌（P<0.001）和中晚期腫瘤（P<0.05）和 MGMT甲基化獨(dú)立相關(guān)。
　　結(jié)論：胸腺上皮腫瘤中，