P553基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與缺血性腦卒中的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的:
　　 腦卒中是世界范圍內(nèi)發(fā)病率、死亡率、致殘較高的疾病之一，與心臟病、惡性腫瘤共同構(gòu)成三大人口致死病因，致殘率高達(dá)75％，嚴(yán)重降低了人類生活質(zhì)量。近些年來，我國(guó)的流行病學(xué)調(diào)查資料表明，腦卒中所致的人口死亡數(shù)僅次于惡性腫瘤，而位居第二位，其中缺血性腦卒中即腦梗死的發(fā)病率占全部腦卒中的60-80％。腦卒中有很多獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，深入探討缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制，有助于臨床選擇合適的治療方案，提高療效及減少后遺

2、癥的發(fā)生，降低缺血性卒中的發(fā)生率及復(fù)發(fā)率。
　　 表觀遺傳學(xué)是指基于非基因序列改變所致基因表達(dá)水平的變化，是機(jī)體組織正常發(fā)育和功能維持的基本機(jī)制之一，其改變可以引起基因功能的改變，因其調(diào)節(jié)機(jī)制可逆性的特點(diǎn)，為疾病的治療提供了新的思路。近年來，缺血性腦卒中發(fā)病中的表觀遺傳機(jī)制成為研究的新方向，其中，DNA甲基化已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容。研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化異常與許多疾病的發(fā)生及發(fā)展相關(guān)。近年來，表觀遺傳學(xué)在

3、心血管疾病方面的文章屢見報(bào)道，而對(duì)于DNA甲基化與腦卒中關(guān)系的研究較少，DNA甲基化在腦卒中發(fā)病中的地位及與相關(guān)關(guān)系并不清楚。本文通過研究缺血性腦卒中患者P53基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)，探討人P53基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與缺血性腦卒中發(fā)病的相關(guān)性。
　　 對(duì)象與方法:
　　 病例組選取2010年10月至2011年2月問在山東大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的腦梗死患者78例，均符合1995年《全國(guó)第四屆腦血管病會(huì)議》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)

4、，并經(jīng)顱腦CT或MRI確診。正常對(duì)照組選取同期健康體檢者86例，病史及體格檢查中均無腦梗死證據(jù)，和（或）頭顱CT/MRI正常者。各組年齡、性別比較差異均無明顯差異，具有可比性。
　　 所有研究對(duì)象均抽取清晨空腹靜脈血，提取基因組DNA，采用MSP方法對(duì)所有受試者的P53基因的啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)，以亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序驗(yàn)證MSP結(jié)果。
　　 結(jié)果:
　　 1.P53基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化在缺血性腦卒中組及對(duì)照組

5、檢出率分別為32.1％(25/78)、16.3％(14/86)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.分別對(duì)病例組和對(duì)照組按年齡分兩組，低齡組（＜60歲）和高齡組(≥60歲)。缺血性腦卒中組各年齡亞組甲基化檢出率分別為27％(10/37)、36.6％(15/41)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.509)。對(duì)照組各年齡亞組甲基化檢出率分別為14.7％(5/34)、17.3％(9/51)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.983)。

6、r>　　 3.分析缺血性腦卒中組中HCY水平，25例甲基化者HCY均值33.91±23.81μM，53例非甲基化者HCY均值23.19±5.67μM，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。
　　 4.缺血性腦卒中組行頸動(dòng)脈彩超檢查的缺血性腦卒中患者共38例，根據(jù)頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，19例甲基化者均值1.06±0.35(mm)，非甲基化者均值0.87±0.19(mm)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);根據(jù)Crous

7、e積分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，19例甲基化者均值4.97±4.40，非甲基化者均值2.82±2.80，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.本研究共65例行顱腦MRA檢查，根據(jù)檢查結(jié)果及將65例研究對(duì)象分為四組:無腦動(dòng)脈硬化組、輕度腦動(dòng)脈硬化組、中度腦動(dòng)脈硬化組、重度腦動(dòng)脈硬化組，分別比較各組甲基化狀態(tài)，四組甲基化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 6.缺血性腦卒中組患者根據(jù)影像學(xué)檢查判斷梗死灶直徑，根據(jù)梗死灶最大

8、直徑分為3組:小面積腦梗死組、中等面積腦梗死組和大面積腦梗死組，比較各組甲基化檢出率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.579)。
　　 7.BSP結(jié)果:BSP方法證實(shí)，在缺血性腦卒中患者外周血中P53基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度較正常對(duì)照患者升高。
　　 結(jié)論:
　　 與對(duì)照組相比，缺血性腦卒中患者P53基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度明顯升高，缺血性腦卒中組內(nèi)比較，P53甲基化程度與頸動(dòng)脈硬化程度、外周血HCY濃度相關(guān)，未發(fā)現(xiàn)甲基化