超濾膜分離在豬血紅蛋白純化工藝中的應(yīng)用研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)的血液資源緊缺，再加上急救外科、地震的發(fā)生等，血液代用品的地位日趨重要。血紅蛋白作為血液代用品的主要原料，其活性和純度與血液代用品的安全性息息相關(guān)。理想的血紅蛋白原料應(yīng)該具有較高純度和濃度且接近紅細胞中血紅蛋白的天然活性。目前已報道的研究成果中，分別用不同的方法純化得到了血紅蛋白溶液，但純化后的血紅蛋白活性受到了不同程度的損傷。超濾是一種對原料活性損傷較小的膜分離技術(shù)手段?；谶@項特點，本實驗將超濾技術(shù)引入到血紅蛋白的純化工作

2、中，以期能純化出高純度、和接近天然紅細胞中血紅蛋白活性的血紅蛋白溶液。
　　 關(guān)于本研究：
　　 目的：建立和優(yōu)化血紅蛋白純化的超濾條件；純化出人工紅細胞研究所需要的高純度和濃度并具有天然紅細胞攜氧能力的的豬血紅蛋白溶液。
　　 方法：首先通過低滲法從豬血紅細胞中提取得到血紅蛋白溶液，然后采用超濾膜分離的方法純化豬血紅蛋白。根據(jù)膜通量與超濾操作壓力和料液溫度的關(guān)系分析確立最佳的超濾純化條件，并在優(yōu)化的超濾條件下純

3、化豬血紅蛋白。并應(yīng)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳法、紫外-可見分光光度法對純化后的血紅蛋白進行了鑒定分析。另外，應(yīng)用血氧分析儀對超濾后的血紅蛋白溶液進行了攜氧能力測定和P50測定。
　　 結(jié)果：在血紅蛋白的超濾過程中，膜通量與操作壓力基本呈線性關(guān)系增加，優(yōu)化的超濾條件為：操作壓力0.05Mpa、料液溫度12℃；在此條件下分離純化的豬血紅蛋白，純度達到了99％以上，濃度較純化前提高了20倍左右。經(jīng)血氧分析儀測定，

4、經(jīng)超濾純化后的豬血紅蛋白P50為20.42，且具有接近天然紅細胞的S型攜氧曲線。
　　 結(jié)論：本課題用超濾技術(shù)純化得到的豬血紅蛋白，不僅達到了一定的濃度和純度標準，而且通過攜氧能力的檢測，證明對血紅蛋白的活性損傷較小。本課題超濾純化得到的血紅蛋白為本實驗室血液代用品的進一步研究提供了較好的原料。
　　 超濾是一種常見的膜分離技術(shù)，有著無污染、條件溫和、使蛋白變性較少和回收率較高等優(yōu)點。因此，本課題的超濾純化血紅蛋白的方法