西格列汀對3T3-L1細胞NALP3炎癥復合體的作用及機制研究.pdf

1、2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)嚴重威脅著人類健康，然而T2DM的發(fā)病機制尚未明確。研究表明，以NALP3炎癥體為中心的慢性炎癥反應參與2型糖尿病的發(fā)生。NALP3炎癥體是核苷酸結構域樣受體(NALPs)家族成員，是新近發(fā)現(xiàn)的活化caspase-1、調控IL-1β成熟和分泌的分子平臺;IL-1β是目前已知促炎活性的細胞因子之一，文獻提示其能夠促進胰島素抵抗的發(fā)展。目前以干預代謝性炎癥通路、降低炎癥因

2、子水平為目標的抗炎治療在T2DM的降糖治療仍處于起步階段。
　　本實驗組的早期觀察研究發(fā)現(xiàn)，西格列汀可能對NALP3炎癥體具有一定抑制作用。本研究旨在本實驗組已有的研究基礎上進一步探討西格列汀對3T3-L1前脂肪細胞內NALP3炎癥體的抑制作用，尋找西格列汀可能存在的藥理新機制，為抗炎治療在T2DM的降糖治療提供理論依據(jù)。
　　方法:將3T3-L1細胞進行常規(guī)培養(yǎng)，設定分組為空白對照組、西格列汀藥物處理組，分別設定濃度梯度及

3、時間梯度。待細胞密度＞90％后48h進行誘導分化，同時按分組設定予以各組藥物作用。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)測定細胞培養(yǎng)基上清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的濃度。用western blot方法測定細胞中NALP3復合體各組分蛋白的表達情況。用real-time PCR測定細胞中NALP3復合體各組分NALP3、ASC、caspase-1RNA表達情況

4、。用Western Blot方法測定細胞中NF-κB及IκBα蛋白表達水平情況。
　　此外將3T3-L1細胞進行常規(guī)培養(yǎng)，設定分組為空白對照組、10nM西格列汀藥物處理組，10nM西格列汀+10nM Exendin9-39藥物處理組，10nM西格列汀+50nM Exendin9-39藥物處理組。待細胞密度＞90％后48h進行誘導分化，同時按分組設定予以各組藥物作用。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linkedimmunosorb

5、ent assay，ELISA)測定細胞培養(yǎng)基上清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的濃度。
　　結果:
　　1.5-100nmol/L西格列汀能明顯抑制3T3-L1細胞誘導分化期IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-6分泌，呈劑量依賴關系。
　　2.10nmol/L西格列汀能明顯抑制3T3-L1細胞誘導分化期IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-6分泌，呈時間依賴關系。
　　3.5-100nm

6、ol/L西格列汀處理3T3-L1細胞誘導分化期一定時間后，細胞內NALP3炎癥體ASC、Caspase1組分表達減少，pro-caspase1組分表達增加。
　　4.10nmol/L西格列汀處理3T3-L1細胞誘導分化期不同的時間均觀察到細胞內NALP3炎癥體ASC、Caspase1組分表達減少，pro-caspase1組分增加。
　　5.5-100nmol/L西格列汀處理3T3-L1細胞誘導分化期一定時間后，細胞內NALP

7、3炎癥體ASC、Caspase1、NLRP3組分mRNA表達減少。
　　6.50nM Exendin9-39能拮抗10nM西格列汀對3T3-L1細胞誘導分化期IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18炎癥因子的抑制效應;10nM Exendin9-39能部分拮抗10nM西格列汀對3T3-L1細胞誘導分化期炎癥因子了的抑制效應。
　　7.10nmol/L西格列汀處理3T3-L1細胞誘導分化期2天后觀察到細胞內NF-κB組分p

8、65表達減少，IκBα蛋白表達增加。
　　結論:
　　西格列汀能夠抑制3T3-L1細胞誘導分化期細胞炎癥因子的表達，且呈現(xiàn)劑量依賴關系和時間依賴關系;同時西格列汀能夠抑制3T3-L1細胞誘導分化期NALP3炎癥體蛋白的表達，NALP3炎癥體各組分mRNA合成減少。我們的實驗提示西格列汀可能依賴GLP-1通路，通過抑制細胞內NF-κB通路抑制NALP3炎癥體，從而抑制炎性介質IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的分泌，