大豆苷改善3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗及其作用機(jī)制.pdf

1、目的:觀察大豆苷對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化以及胰島素抵抗脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響,并探討其作用機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,并用含有地塞米松、胰島素和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤的誘導(dǎo)分化液將其分化為脂肪細(xì)胞。設(shè)置空白對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、藥物處理組(0.1、0.3、1、3、10μM)及陽(yáng)性藥組,藥物作用時(shí)間均為48h。采用MTT法檢測(cè)藥物對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖的影響;油紅O染色法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞分化的影響。以1μM地塞米

2、松誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞,建立胰島素抵抗模型。給予不同藥物干預(yù)后,采用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶(GOD-POD)法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中葡萄糖含量;比色法檢測(cè)游離脂肪酸(FFA)含量;ELISA法檢測(cè)脂聯(lián)素含量;qPCR法分析脂聯(lián)素、PPARγ、PTP1B、IRS-1以及 GLUT4的mRNA表達(dá)。此外,采用嵌合蛋白基因試驗(yàn)檢測(cè) PPARγ配體結(jié)合活性;比色法檢測(cè)PTP1B酶活性。
　　結(jié)果:
　　1.與溶媒對(duì)照組比較,大豆苷

3、在濃度3、10μM時(shí)能明顯促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖(P<0.05或P<0.01);在濃度0.1～1μM時(shí)顯著抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化(P<0.05或P<0.01)。
　　2.與溶媒對(duì)照組比較,模型對(duì)照組在給予1μM地塞米松作用96 h后,其葡萄糖消耗量明顯減少42.5％(P<0.01)。成功建立了胰島素抵抗脂肪細(xì)胞模型。
　　3.與模型對(duì)照組比較,無(wú)論在基礎(chǔ)狀態(tài)還是胰島素刺激狀態(tài),大豆苷在濃度0.3～10μM時(shí)

4、均顯著促進(jìn)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗(P<0.05或P<0.01),且隨著濃度增加,作用增強(qiáng);同時(shí),其在濃度0.1～10μM時(shí)能顯著抑制胰島素抵抗脂肪細(xì)胞游離脂肪酸的產(chǎn)生(P<0.05或P<0.01)。
　　4.與溶媒對(duì)照組比較,大豆苷能顯著抑制PTP1B酶活性,尤其是在濃度為1μM時(shí)抑制率可達(dá)37.67%(p<0.01);同時(shí)其顯示有一定的PPARγ激活作用,但作用較弱(P<0.05)。
　　5.與模型對(duì)照組比較,大豆

5、苷能顯著促進(jìn)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素分泌,上調(diào)脂聯(lián)素、IRS-1、GLUT4的mRNA表達(dá)以及下調(diào)PTP1B的mRNA表達(dá)(P<0.05或P<0.01),但對(duì)PPARγ的mRNA表達(dá)則無(wú)明顯影響(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大豆苷能促進(jìn)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗和脂聯(lián)素分泌,抑制脂肪細(xì)胞的分化以及游離脂肪酸的產(chǎn)生,具有改善胰島素抵抗的作用。
　　2.大豆苷改善胰島素抵抗的主要機(jī)制可能與其抑制PTP1B酶活